论文摘要
目的观察靶向MDM2的小干扰RNA（siRNA）对骨肉瘤生长的影响。方法1、应用免疫组化方法检测MDM2在人骨肉瘤组织的表达;2、以MDM2已知序列为靶点,构建PGCsilencerTM-MDM2 siRNA重组质粒;3、通过体外、体内实验,研究重组质粒转染骨肉瘤U20细胞及裸鼠瘤内注射重组质粒后MDM2的表达情况及细胞凋亡情况。结果1、免疫组织化学研究结果提示MDM2的过度表达在骨肉瘤的发生、发展过程中起重要作用。2、成功地构建了PGCsilencerTM-MDM2 siRNA重组质粒,为进一步研究MDM2结构与功能及RNAi技术的应用提供了方便条件。3、成功地将重组质粒转染入骨肉瘤U20细胞,为后续的研究工作作好了铺垫。4、PGCsilencerTM-MDM2 siRNA重组质粒转染U20骨肉瘤细胞后MDM2的表达无论在蛋白水平还是在基因水平上都明显下调,体外研究结果证实,RNA干涉MDM2基因的效果具有特异性和高效性。5、成功地建立了骨肉瘤裸鼠动物模型:通过体内实验,证实瘤内注射PGCsilencerTM-MDM2 siRNA重组质粒且应用电穿孔技术可明显抑制裸鼠骨肉瘤的生长,降低肿瘤体积及重量。结果显示,MDM2的表达明显受抑,且促进了细胞的凋亡及肿瘤组织坏死。结论应用RNAi技术沉默MDM2基因可以降低骨肉瘤细胞中MDM2的表达,导致细胞凋亡进而抑制肿瘤的生长。