艾叶挥发油的免疫作用及其对部分细胞因子mRNA表达的影响

论文摘要

本文以小鼠为研究对象,通过对艾叶挥发油进行提取,制备了不同浓度的艾叶挥发油乳剂,分别从整体水平、细胞水平和分子水平上探讨其免疫作用机制,现将结果报道如下:（1）采用水蒸汽蒸馏法提取艾叶挥发油。并利用乳化技术制备出均匀、稳定的艾叶挥发油乳剂。（2）采用纸片法和试管倍比稀释法进行体外抑菌试验,结果表明:艾叶挥发油对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、炭疽杆菌、大肠埃希菌、荧光假单胞菌、嗜水气单胞菌、产酸克雷伯菌、鱼害粘球菌、副溶血菌均有较强的抑菌作用,其最低抑菌浓度（MIC）分别为1×10-4mL/mL、1×10-4mL/mL、0.063×10-4mL/mL、1×10-4mL/mL、0.5×10-4mL/mL、0.5×10-4mL/mL、2×10-4mL/mL、2×10-4mL/mL、1×10-4mL/mL。且具有一定的杀菌作用,其中对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、炭疽杆菌、荧光假单胞菌、嗜水气单胞菌、鱼害粘球菌最低杀菌浓度（MBC）分别为1×10-4mL/mL、1×10-4mL/mL、2×10-4mL/mL、0.5×10-4mL/mL、0.5mL/mL、2×10-4mL/mL。但对巴氏杆菌、链球菌、沙门氏菌的抑菌效果不明显。说明艾叶挥发油对畜禽和水生生物常见病原菌有一定的抑菌效果。（3）采用血液自动分析仪进行血常规分析,采用生化试剂盒进行血液生化指标测定,试验结果表明:各个剂量对血常规未有明显的作用,与对照组相比,小鼠的血液生化指标TP、ALB、SOD、AKP、LZM差异显著（P＜0.05）,特别是对AKP活性的影响,三个剂量组均差异极显著（P＜0.01）。说明艾叶挥发油能改善动物机体的营养状况,提高机体免疫功能。（4）采用常规免疫测定技术对添加艾叶挥发油的3个剂量组与对照组比较,小鼠的肝指数、碳廓清指数（K）、吞噬指数（a）、迟发型变态反应、MTT、溶血素均有一定的提高作用,且高剂量组差异显著（P＜0.05）,但对小鼠的脾指数差异不显著（P＞0.05）。说明一定剂量的艾叶挥发油具有提高免疫作用的能力。（5）采用半定量RT-PCR测定小鼠脾组织中IL-2、IL-4、IFN-γmRNA的表达水平,试验结果表明:与对照组相比,IL-2、IL-4、IFN-γmRNA的表达水平均提高,其中各个剂量组艾叶挥发油对IL-2差异显著（P＜0.05）,且中、高剂量组对IL-2差异极显著（P＜0.01）;中、高剂量组对IL-4差异显著（P＜0.05）;但对IFN-γ差异不显著（P＞0.05）,说明一定剂量的艾叶挥发油能提高IL-2、IL-4的表达量,从而提高机体的免疫功能与抗病能力。综上所述,采用蒸馏法和挥发油提取器提取艾叶挥发油的方法简便易行,制备的乳剂具有良好的稳定性。研究表明:艾叶挥发油具有显著的体外抗菌活性;在一定剂量范围内能从整体水平、细胞水平和分子水平三个不同层次提高机体的免疫功能。

论文目录

• 中文摘要
• abstract
• 第一章 绪论
• 1 艾叶的研究进展
• 2 艾叶挥发油的研究进展
• 2.1 艾叶挥发油的化学成分分析研究
• 2.2 免疫药理作用
• 2.2.1 免疫作用
• 2.2.2 抗菌抗病毒作用
• 2.2.3 平喘、镇咳、祛痰作用
• 2.2.4 抗过敏作用
• 2.2.5 对心血管系统作用
• 2.2.6 镇静镇痛作用
• 2.2.7 利胆作用
• 2.2.8 抗疲劳作用
• 2.2.9 抗膝关节炎作用
• 2.2.10 抗癌作用
• 2.3 毒性作用
• 3 研究的目的与意义
• 3.1 研究目的
• 3.2 研究的背景与意义
• 第二章 艾叶挥发油的体外抑菌作用研究
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 主要材料
• 1.1.2 主要仪器
• 1.1.3 菌种
• 1.1.4 试剂和培养基的配制
• 1.2 方法
• 1.2.1 艾叶挥发油的提取
• 1.2.2 艾叶挥发油的配制
• 1.2.3 体外抗菌试验
• 2 结果与分析
• 2.1 艾叶挥发油的提取与保存
• 2.2 乳剂的选择和浓度的确定
• 2.3 艾叶挥发油的MIC和MBC测定结果
• 2.3.1 艾叶挥发油对畜禽常用病原菌的抑菌作用
• 2.3.2 艾叶挥发油对水产常用病原菌的抑菌作用
• 3 讨论
• 4 小结
• 第三章 艾叶挥发油对小鼠生理生化指标的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 艾叶挥发油乳剂的制备
• 1.2 主要试剂
• 1.3 主要仪器
• 1.4 试验方法
• 1.4.1 试验动物及分组
• 1.4.2 血样的采集与处理
• 1.4.3 血液生理生化指标的测定
• 2 结果
• 2.1 艾叶挥发油对小鼠血常规的影响
• 2.2 艾叶挥发油对小鼠血液生化指标的影响
• 3 讨论
• 3.1 艾叶挥发油对血液常规指标的影响
• 3.2 艾叶挥发油对血液生化指标的影响
• 3.2.1 对血清总蛋白和白蛋白含量的影响
• 3.2.2 对超氧化物歧化酶活性的影响
• 3.2.3 对碱性磷酸酶活性的影响
• 3.2.4 对血清溶菌酶含量的影响
• 4 小结
• 第四章 艾叶挥发油对小鼠免疫功能的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 主要试剂
• 1.2 主要仪器
• 1.3 试剂配制
• 1.3.1 RPM11640培养液
• 1.3.2 完全培养液
• 1.3.3 0.01mol的PBS的制备
• 1.3.4 MTT溶液
• 1.3.5 ConA溶液
• 1.3.6 注射用墨汁
• 2CO₃溶液'>1.3.7 Na₂CO₃溶液
• 1.3.8 Alserver's液（SRBC保存液）
• 1.3.9 SRBC溶液
• 1.3.10 补体
• 1.3.11 胰蛋白酶消化液
• 1.4 实验动物及分组
• 1.5 方法
• 1.5.1 小鼠脏器/体重比值
• 1.5.2 小鼠碳廓清试验
• 1.5.3 ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验（MTT法）
• 1.5.4 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能测定
• 1.5.5 小鼠迟发型变态反应的影响
• 1.5.6 血清溶血素测定
• 1.5.7 试验数据统计方法
• 2 结果
• 2.1 艾叶挥发油对小鼠脏器指数的影响
• 2.2 艾叶挥发油对小鼠碳廓清的影响
• 2.3 艾叶挥发油对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响
• 2.4 艾叶挥发油对小鼠迟发型变态反应的影响
• 2.5 艾叶挥发油对小鼠血清溶血素效价的影响
• 3 讨论
• 3.1 艾叶挥发油对小鼠脏器指数的影响
• 3.2 艾叶挥发油对小鼠单核巨噬细胞吞噬功能的影响
• 3.3 艾叶挥发油对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响
• 3.4 艾叶挥发油对小鼠迟发型变态反应的影响
• 3.5 艾叶挥发油对小鼠血清溶血素效价的影响
• 5 小结
• 第五章 艾叶挥发油对小鼠细胞因子基因表达的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 主要试剂
• 1.2 主要仪器
• 1.3 试剂配制
• 2O的配制'>1.3.1 0.1%DEPC-H₂O的配制
• 1.3.2 1%琼脂糖凝胶液
• 1.3.3 EB贮存液配制
• 1.3.4 5×TBE电泳缓冲液
• 1.4 试验方法
• 1.4.1 脾脏的采集
• 1.4.2 总RNA的提取
• 1.4.3 反转录
• 1.4.4 目的基因PCR扩增
• 1.5 统计学方法
• 2 结果与分析
• 2.1 RNA质量的检测
• 2.1 脾细胞因子mRNA表达
• 3 讨论
• 3.1 细胞因子检测方法
• 3.2 艾叶挥发油对小鼠IL-2mRNA表达的影响
• 3.3 艾叶挥发油对小鼠IL-4mRNA表达的影响
• 3.4 艾叶挥发油对小鼠IFN-γ mRNA表达的影响
• 4 小结
• 第六章 结论与创新点
• 1 结论
• 2 创新点
• 3 展望
• 参考文献
• 英文缩略词一览表
• 致谢
• 作者简历