红霉素生物合成基因eryA启动子的克隆与功能研究

论文摘要

eryA是直接控制着红霉素母环6-脱氧-红霉内酯B合成的基因，在红霉素生物合成过程中具有重要作用。本研究克隆了eryA基因的启动子PeryA，以绿色荧光蛋白基因作为报告基因，构建了一种大肠杆菌-糖多孢红霉菌穿梭型质粒。荧光显微镜观察发现PeryA不但在糖多孢红霉菌中起作用，而且在异源宿主变铅青链霉菌中也具有功能。随后，以变铅青链霉菌为宿主，详细研究了该启动子作为链霉菌表达载体启动子的特征，结果发现该启动子的-35区并不是必需的，而且仅有-10区、长度为41bp的该启动子在链霉菌中仍可以表达外源基因。定点突变证明-10区对于该启动子是不可缺少的。因此，41bp的该启动子片段可作为链霉菌的有效启动子，这是迄今为止所发现的最短的链霉菌启动子之一，对构建新的链霉菌表达载体将非常有用。此外，我们对PeryA启动子附近的区域进行了初步分析，结果发现包括eryA编码基因前300bp的启动子序列不能表达外源基因，其具体原因的阐明将为更深入探讨红霉素生物合成基因调控奠定基础。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 目录
• 缩略词表
• 第一部分 引言
• 1 红霉素类药物
• 2 红霉素分子生物学的研究进展
• 3 链霉菌抗生素生物合成基因簇的组成特点
• 4 链霉菌抗生素生物合成的调控机制
• 第二部分 材料与方法
• 1 材料
• 2 方法
• 第三部分 结果与分析
• 1 红霉素生物合成基因eryA启动子作为链霉菌表达载体启动子的研究
• 1.1 eryA启动子的克隆
• 1.1.1 引物设计
• 1.1.2 pUP质粒的构建
• 1.1.3 pUP质粒的鉴定
• 1.2 大肠杆菌-糖多孢红霉菌穿梭质粒pUPW-EGFP的构建
• 1.3 eryA基因启动子的特征
• 1.3.1 转化菌株的荧光显微镜检测
• 1.3.2 转化菌株的荧光强度测定
• 1.4 PeryA作为链霉菌表达载体启动子的特性
• 2 红霉素生物合成基因eryA启动子调控的初步分析
• 2.1 引物设计
• 4和pUP₅质粒的构建'>2.2 pUP₄和pUP₅质粒的构建
• 4和pUP₅质粒的鉴定'>2.3 pUP₄和pUP₅质粒的鉴定
• 2.4 PeryA启动子上游和下游临近区域的分析
• 3 讨论
• 第四部分 总结
• 1 本研究主要获得的结果
• 2 本研究的创新之处
• 3 需进一步研究的问题
• 论文部分参考文献
• 附录
• 综述 链霉菌自动调控因子的研究进展
• 致谢
• 硕士期间发表论文目录