牛IL-18真核表达载体的构建及其对FMD疫苗免疫增强作用的研究

论文摘要

白细胞介素-18（interleukin-18,IL-18）是Okamura等（1995）从小鼠肝脏中克隆获得的。Nakamori等（2003）研究发现,IL-18具有抗肿瘤、抗感染及免疫调节等着重要作用,在免疫治疗及免疫佐剂方面有着潜在的应用前景。口蹄疫（Foot and Mouth Disease, FMD）是危害牛、猪、羊等偶蹄动物以及人的一种烈性传染病,如何增强动物的抗病能力和免疫应答水平,最大限度地提高疫苗的免疫效果是当前我国防制口蹄疫生产实践中迫切需要解决的问题。近年来随着分子生物学和免疫学研究的进展,白细胞介素作为疫苗高效分子佐剂己成为疫苗免疫佐剂研究的热点,但牛IL-18对口蹄疫疫苗的免疫增强作用如何尚不清楚,为此,本研究从分子免疫佐剂的角度出发构建了牛IL-18真核表达载体,并研究了该表达载体对FMD灭活疫苗的免疫增强作用。本论文根据GeneBank收录的牛白细胞介素-18（BoIL-18）基因序列,设计一对特异性引物,以其原核表达质粒为模板,进行PCR扩增,其产物与真核表达载体pcDNA3.1重组,阳性克隆经PCR扩增和核酸内切酶酶切鉴定准确无误,核酸序列测定结果与原始基因序列完全一致,阅读框也正确无误,将该重组质粒命名为pcDNA3.1-BoIL-18。将pcDNA3.1-BoIL-18重组质粒大量提取后与FMD疫苗同时免疫小白鼠,结果表明同时接种的小白鼠T淋巴细胞转化率和NK细胞活性在接种第21天后均明显高于单纯疫苗组,所产生的中和抗体效价在28天后与单纯疫苗组差异显著。从而说明牛IL-18真核表达质粒pcDNA3.1-BoIL-18在小白鼠体内得到了良好表达,而且表达产物对FMD灭活疫苗免疫效果具有明显的增强作用。本研究结果不仅进一步证实了细胞因子作为免疫佐剂的作用,而且为采用细胞因子类分子佐剂提高FMD疫苗免疫效果的进一步研究提供了科学依据。

论文目录

• 缩略语英汉对照表
• 中文摘要
• Abstract
• 引言
• 第一部分 白细胞介素-18 的研究进展
• 1.1 IL-18 的发现
• 1.2 IL-18 的分布与产生
• 1.3 IL-18 的分子特性
• 1.4 IL-18 的基因结构和基因表达特性
• 1.5 IL-18 的生物学作用
• 1.6 IL-18 与疾病
• 1.7 牛IL-18 的研究进展
• 1.8 IL-18 的应用前景
• 第二部分 口蹄疫用其佐剂的研究进展
• 2.1 口蹄疫概况
• 2.2 口蹄疫的免疫机制
• 2.3 免疫佐剂的研究进展
• 2.4 口蹄疫疫苗佐剂的研究进展
• 2.5 白细胞介素分子佐剂研究进展
• 试验一 牛白介素-18 真核表达载体的构建
• 3.1 材料
• 3.1.1 质粒、细胞、受体菌及培养基
• 3.1.2 主要试剂及试剂盒
• 3.1.3 培养基及主要试剂的配制方法
• 3.1.4 主要仪器及设备
• 3.2 方法
• 3.2.1 引物设计及PCR 扩增
• 3.2.2 重组质粒的构建
• 3.2.3 重组质粒的鉴定
• 3.3 结果与分析
• 3.3.1 重组真核表达质粒的鉴定
• 3.3.2 测序结果
• 3.4 讨论
• 试验二 牛白介素-18 真核表达质粒对口蹄疫疫苗免疫增强作用的研究
• 4.1 材料
• 4.1.1 试验动物
• 4.1.2 口蹄疫灭活疫苗
• 4.1.3 检测和抽提试剂盒
• 4.1.4 试验用质粒
• 4.1.5 主要试剂
• 4.1.6 主要仪器及设备
• 4.2 方法
• 4.2.1 pcDNA3.1-BoIL-18 的大量抽提
• 4.2.2 免疫方法
• 4.2.3 抗体检测
• 4.2.4 脾脏T 淋巴细胞增殖能力检测
• 4.2.5 NK 细胞活性测定
• 4.2.6 数据处理方法
• 4.3 结果与分析
• 4.3.1 牛IL-18 表达质粒对中和抗体的影响
• 4.3.2 牛IL-18 表达质粒对脾脏T 淋巴细胞增殖反应的影响
• 4.3.3 牛IL-18 表达质粒对脾脏NK 细胞杀伤活性的影响
• 4.4 讨论
• 结论
• 参考文献
• 攻读硕士期间发表的主要论文
• 致谢
• 个人简介