竹林根际可培养微生物种群多样性分析

论文摘要

本论文以四川省卧龙自然保护区冷箭竹林和浙江省天目山和重庆市缙云山两个地区天然毛竹林根际土壤为研究对象,分别采用平板分离法调查了竹林土壤微生物的数量；根据平板菌落形态差异分离菌株；革兰氏染色观察分离菌的形态和大小；测定分离菌株的16S rDNA序列,进行系统发育和细菌多样性分析。研究的主要结果如下：（1）冷箭竹林微生物数量细菌>真菌>放线菌,数量范围为106cfu／g,104cfu／g和0cfu／g；毛竹林微生物数量细菌>放线菌>真菌,数量范围105cfu／g,103-105cfu／g,104cfu／g。细菌在所研究的样品中均为优势菌群。（2）竹林根际细菌和放线菌菌落表型丰富,共分离获得118株菌落表性差异的细菌,14株菌落表型差异的放线菌。四川卧龙冷箭竹根际土壤、浙江天目山毛竹根际土壤和重庆缙云山毛竹根际土壤中分离细菌,染色后显微观察结果分别为：G+芽孢杆菌分别为9株、27株和20株；G+杆菌（非芽孢菌）分别为2株、3株和2株；G-杆菌分别为37株、9株和7株；G+球菌分别为1株、1株和0株；各土壤中均以杆菌为主。（3）获得的132株菌的16S rDNA有效序列BLAST比对分析,除20株与已报道的相似性只有83%-96%,其余均大于等于97%。根据序列相似性四川卧龙冷箭竹、浙江天目山毛竹和重庆缙云山毛竹林三个样品划分的分类单元分别为26、32、19。Shannon-Wiener多样性指数（H）分别为4.2244、4.7389和3.9064。均匀度指数（E）分别为0.8987、0.9478和0.9196。以天目山毛竹根际细菌多样性指数和均匀度高。（4） 16S rDNA系统发育分析表明,竹林根际中的微生物类群主要属于厚壁菌门,变形菌门,放线菌门等。芽孢杆菌属（Bacillus）（优势菌属）和不动杆菌属（Acinetobacter）在所研究土样中均有分离。从属的水平上来看,两个毛竹土样菌群结构之间相似性较大,冷箭竹与毛竹不同竹种土样之间具有一定的相似性,但更多的是呈现自己特有的菌群结构。（5）从竹林根际分离的菌株,大部分与从农作物根区土壤中分离的菌相似性较高。只在冷箭竹根际分离出4株与耐冷菌相似性较高的菌。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 第1章 文献综述
• 1.1 土壤微生物多样性的研究进展
• 1.1.1 土壤微生物多样性的概念
• 1.1.2 土壤微生物多样性和植物的关系
• 1.1.3 土壤微生物研究方法进展
• 1.2 微生物的分类鉴定技术
• 1.2.1 经典分类研究
• 1.2.2 数值分类
• 1.2.3 化学分类
• 1.2.4 现代分子分类技术
• 1.3 本论文研究的内容和方法
• 第2章 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 土样来源
• 2.1.2 主要仪器
• 2.1.3 培养基
• 2.1.4 革兰氏染色（结晶草酸铵染色法）染液
• 2.1.5 缓冲液和试剂
• 2.1.6 DNA提取试剂
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 微生物的分离和计数
• 2.2.2 菌株的纯化和菌落形态观察
• 2.2.3 分离菌株的革兰氏染色及菌体形态观察
• 2.2.4 16S rDNA序列测定和系统发育分析
• 2.2.5 种群多样性分析
• 第3章 结果与讨论
• 3.1 竹林根际土壤微生物的数量
• 3.2 分离菌株的菌落形态
• 3.3 分离菌株的菌体形态观察
• 3.4 分离菌株的16S rDNA序列分析
• 3.4.1 培养物的16S rDNA基因的扩增
• 3.4.2 竹林根际微生物的多样性
• 3.4.3 基于分离菌株16S rDNA序列的系统发育分析
• 3.5 竹林根际土壤种群结构分析
• 3.6 竹林根际土壤种群多样性
• 3.7 根际微生物多样性研究方法
• 第4章 结论与创新性
• 4.1 结论
• 4.2 本研究的创新点
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 硕士期间发表论文
• 作者简历