甘露寡糖对兔肠道微生态影响的研究

论文摘要

作者以SPF大耳型白兔为实验动物,以免疫学、微生物学和分子生物学作为主要技术手段。通过甘露寡糖的分析与研究、试验动物的饲养及肠道变化的观察、以及甘露寡糖对SPF大耳型白兔肠道微生物多样性影响的研究三个主体实验,对甘露寡糖的理化性质及其促进动物生长的作用机理做了深入的研究,主要结果如下:1甘露寡糖的成分分析为研究甘露寡糖的成分,采用乙醇逐级沉淀法得到不同体积下的沉淀,将各沉淀的2%溶液在620 nm下测定其OD值,与还原糖标准曲线比较,得到1:3、1:4、1:6、1:9沉淀中还原糖含量为42.9μg,58.2μg,85.3μg,94.3μg。再分别对试验寡糖2%溶液、2%的1:3、1:4、1:6、1:9沉淀溶液、1:9上清、标准甘露寡糖2%溶液以及糖Marker进行薄板层析,对各组分进行基本的定性,再采用液相色谱分析了2%的1:3上清和1:3沉淀中各糖的含量,多糖、二糖、葡萄糖、果糖、总糖含量（以g/kg干基计）分别为:1:3上清:156.00、3.36、12.52、2.61、174.49;1:3沉淀:182.88、0.70、3.98、0.50、188.06。2甘露寡糖对兔肠道肠道菌群和肠道结构影响的研究为研究甘露寡糖对动物肠道的影响,选用体重为300 g±20.0 g同性（雌性）、同品系的SPF大耳型白兔作为试验动物进行试验,将试验用的大耳型白兔分为8组,每天记录其体重及采食量。在第1天、第7天、第14天、第21天和最后一天（第28天）各处死四只大耳型白兔并解剖,分别厌氧取空肠、回肠、结肠、盲肠及直肠以及其内容物,内容物在-70℃保存。小肠用PBS冲洗肠壁,收集肠液储存于-20℃备用。研究结果表明:甘露寡糖对大耳型白兔的生长发育影响不明显,但对肠道菌群的数量和肠道结构有显著影响。3甘露寡糖对SPF大耳型白兔肠道微生物多样性影响的研究研究甘露寡糖对SPF大耳型白兔肠道微生物影响的关系。从饲养28 d的大耳型白兔盲肠内容物中直接提取总DNA,PCR扩增获得16SrDNA片段,进行DGGE分析,同时采用普通PCR法进行连接-转化-克隆筛选,测序比较。结果表明:饲喂的不同水平对大耳型白兔肠道微生物的影响较大,DGGE条带数目最低为18,最高为37;8组共有的条带为3。表明甘露寡糖对动物肠道菌群的平衡有显著作用,直接影响菌群数量和组成。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一章 前言
• 1 甘露寡糖的研究历程
• 2 甘露寡糖的理化性质及生理功能
• 2.1 甘露寡糖的理化性质
• 2.2 甘露寡糖的生理功能
• 2.2.1 促进肠道内健康微生物菌相的形成
• 2.2.2 结合外源性病原菌
• 2.2.3 刺激动物机体的免疫反应机能
• 3 甘露寡糖的作用机制
• 3.1 调节非免疫防御机制
• 3.2 调节免疫防御机制
• 3.3 吸附霉菌毒素
• 4 甘露寡糖在动物生产中的应用
• 4.1 甘露寡糖在养禽业中的应用
• 4.2 甘露寡糖在仔猪生产中的应用
• 4.2.1 甘露寡糖对仔猪免疫系统的影响
• 4.2.1.1 对仔猪体液免疫的影响
• 4.2.1.2 对细胞免疫的影响
• 4.2.2 甘露寡糖对仔猪生产性能的影响
• 4.3 甘露寡糖在幼龄反刍动物生产中的应用
• 5 影响饲料甘露寡糖使用效果因素
• 5.1 动物种类、年龄和生理状态
• 5.2 甘露寡糖种类、纯度、聚合度和生理活性
• 5.3 甘露寡糖添加量与添加方式
• 5.4 日粮组成
• 5.5 饲养环境
• 5.6 与抗生素、益生素的协同作用
• 6 甘露寡糖的应用研究展望
• 7 本研究的目的和意义
• 第二章 甘露寡糖的成分分析
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 实验材料
• 1.1.2 主要试剂和仪器
• 1.2 方法
• 2 结果
• 2.1 试验寡糖的分析
• 2.2 试验寡糖与标准曲线的对比
• 2.3 薄板层析
• 2.4 高效液相色谱
• 3 讨论
• 3.1 薄板层析
• 3.2 液相色谱
• 第三章 甘露寡糖对兔肠道菌群和肠道结构影响的研究
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 试验动物
• 1.1.2 菌株
• 1.1.3 主要试剂与仪器
• 1.2 方法
• 1.2.1 试验动物准备及饲养
• 1.2.2 肠道菌群数量的变化观察
• 1.2.2.1 定性检测
• 1.2.2.2 定量检测
• 1.2.2.3 厌氧罐使用方法及原理
• 1.2.3 结肠组织切片分析
• 1.2.4 空肠结构变化
• 2 结果
• 2.1 SPF大耳型白兔的生长发育变化
• 2.2 甘露寡糖对试验动物肠道菌群的影响
• 2.3 抑菌试验
• 2.4 组织结构的变化
• 2.4.1 组织切片分析
• 2.4.2 空肠结构变化
• 2.5 数据处理
• 3 讨论
• 第四章 甘露寡糖对SPF大耳型白兔肠道微生物多样性影响的研究
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 菌株和质粒
• 1.1.2 主要试剂和仪器
• 1.2 方法
• 1.2.1 肠道内容物总DNA的提取
• 1.2.2 总DNA的电泳观察
• 1.2.3 PCR扩增
• 1.2.4 PCR产物采用天为时代回收试剂盒进行纯化
• 1.2.5 DGGE电泳
• 1.2.6 PCR产物的连接-转化-克隆筛选
• 1.2.7 序列的测定与系统发育分析
• 2 结果
• 2.1 样品的预处理
• 2.2 样品中DNA的电泳观察
• 2.3 16S Rdna基因的PCR扩增与产物纯化
• 2.4 DGGE分析
• 2.5 应用16S Rdna的部分序列构建肠道微生物的系统发育树
• 3 讨论
• 3.1 DGGE电泳和系统发育树构建结果分析
• 3.2 PCR条件的建立
• 3.3 DGGE在肠道微生物菌群多样性中的应用
• 第五章 结论
• 附录A 主要试剂的配制
• 附录B 石蜡切片的制作
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介