论文摘要
目的与方法：Graves病（Grave’s disease, GD）和桥本甲状腺炎（Hashimoto’s Thyroiditis,HT）为器官特异性自身免疫性甲状腺疾病（AITD）的两种主要表现形式,其病理分型与间质淋巴细胞浸润程度相关。根据间质淋巴组织浸润程度将GD分为三型,其浸润程度分别为：I型（<10%）,II型（10%-20%）,Ⅲ型（20%-40%）；根据Woolner’s分类法将HT分为三型,其淋巴组织浸润程度分别为：淋巴细胞型（Lymphoid type, L型：20%-40%）,嗜酸性上皮细胞型（Oxyphilic epithelium type,0型：40%-80%）,明显上皮破坏型（Pronounced epithelium destruction type, P型：80%-100%）。国内外关于CK-19、VEGF-C、COX-2和Vimentin在甲状腺乳头状癌和滤泡癌中的表达的研究报道较多,在良性病变AITD中的研究较少。本文第一部分采用免疫组织化学方法对GD和HT中CK-19、VEGF-C、COX-2和Vimentin的表达进行检测,通过分析四种指标在GD、HT中的表达,探讨这四种指标的表达与GD和HT的诊断、鉴别诊断、淋巴细胞浸润、病情进展之间的关系。CK19、VEGF-C、COX-2和Vimentin在GD、HT的阳性表达率的比较采用χ2验（Fisher检验）,阳性强度比较采用秩和检验。两组等级资料的相关性采用双变量相关分析（Bivariate）等级相关系数（Spearman相关系数）非参数检验, GD和HT年龄比较采用两独立样本的t检验。本文第二部分应用逆转录PCR （RT-PCR）和荧光定量PCR （SYBR Green QRT-PCR）两种方法分别定性和定量检测HT、甲状腺乳头状癌和结节性甲状腺肿中雌激素受体（Estrogen receptor;ER）和孕激素受体（Progesterone receptor,PR）基因的表达情况,主要对ER和PR与HT的相关性进行分析,探讨性激素与HT发病及病情严重程度的关系,为HT的临床诊断和治疗提供理论依据。荧光定量检测的ER结果采用完全随机设计下定量资料的方差分析。结果：1.GD、HT性别比（男/女）分别为1：5.33、1：18.33,GD性别比与HT的性别比经χ2检验差异有显著性（χ2=27.32,P<0.05）。GD、HT平均确诊年龄分别为31.72、45.67（岁）,经t检验差异有显著性（t=-7.03,P<0.01）,GD男性平均确诊年龄（40.22岁）高于女性平均确诊年龄（30.13岁）,经t检验差异有统计学意义（t=2.774,P<0.01）,HT男性平均确诊年龄（51.67岁）高于女性平均确诊年龄（45.35岁）,经t检验差异无统计学意义。2.CK-19主要表达于病变区甲状腺滤泡上皮细胞的胞浆。HT中CK-19的阳性表达率（86.2%）显著高于GD（43.9%）,GDⅢ型（81.3%）显著高于GDⅠ型（15.8%）,GDⅢ型显著高于GDⅡ型（40.9%）,HT-P型（100%）显著高于HT-L型（66.7%）,以上差异均有统计学意义（P<0.05）。HT中CK-19的阳性表达强度高于GD,差异有统计学意义（P<0.05）。3.VEGF-C阳性物质主要表达于病变区甲状腺滤泡上皮的胞浆中。HT中VEGF-C的阳性表达率（96.6%）显著高于GD（56.1%）,GDⅢ型阳性率（87.5%）显著高于GDⅠ型（36.84%）,GDⅢ型显著高于GDⅡ型（50.0%）,以上差异均有统计学意义（P<0.05）。HT中VEGF-C的阳性表达强度显著高于GD,差异有统计学意义（P<0.05）。4.GD、HT各型的甲状腺滤泡上皮细胞中均可见到COX-2的阳性免疫反应,分布于胞浆中。GD中COX-2的阳性表达率（91.2%）与HT（93.1%）相近,但HT的阳性表达强度显著高于GD,差异有统计学意义（P<0.05）。GD各型的阳性率分别为GDⅠ型89.5%,GDⅡ型90.9%GDⅢ型93.8%,阳性率相近。HT各型的阳性率分别为HT-L型85.7%,HT-0型94.7%,HT-P型100.0%,阳性率亦相近,其中HT-O型的阳性表达强度显著高于HT-L型,差异有统计学意义（P<0.05）。5. Vimentin阳性表达主要见于GD和HT的滤泡上皮细胞间的间质和部分滤泡上皮细胞胞浆中。GD和HT中Vimentin的阳性表达率均为100%,Vimentin在GD中的阳性表达强度略高于HT,差异无统计学意义（P<0.05）。6.GD中43.9%的病例CK-19和Vimentin表达一致（同时阳性或同时阴性）,经过Spearman等级相关分析,相关系数r=0.223（P>0.05）。HT中86.2%的病例CK-19和Vimenitn表达一致,经过Spearman等级相关分析,相关系数r=0.113（P>0.05）。GD中61.4%病例VEGF-C和COX-2表达一致,经过Spearman等级相关分析,相关系数r=0.209（P>0.05）。HT中93.1%的病例VEGF-C和COX-2表达一致,经过Spearman等级相关分析,两者在HT中的表达呈正相关关系,相关系数r=0.552（P<0.05）。7.RT-PCR结果显示HT、甲状腺乳头状癌和结节性甲状腺肿在100-250bp之间均可见ER阳性目的条带,均未见PR阳性目的条带。HT的ER阳性率为100%（2/2）,甲状腺乳头状癌的ER阳性率为14%（1/7）,结节性甲状腺肿的ER阳性率为80%（4/5）。8.荧光定量PCR结果显示,HT中ER的表达量高于甲状腺乳头状癌和结节性甲状腺肿。HT与结节性甲状腺肿间,HT与甲状腺乳头状癌间,甲状腺乳头状癌与结节性甲状腺肿间ER表达量差别均无统计学意义。结论1.GD平均确诊年龄（31.72岁）低于HT（45.67岁）,差别有统计学意义（P<0.05）,提示随着病情由GD向HT不断进展,浸润程度不断增加,患者的确诊年龄也逐渐增高。GD男性平均确诊年龄（40.22岁）高于女性（30.13岁）,差异有统计学意义。由此提示不同性别GD的发病年龄有差别,男性发病年龄较大。GD、HT性别比（男/女）分别为1：5.33、1：18.33,GD性别比与HT的性别比经χ2检验差异有显著性（P<0.05）,提示GD和HT均以女性多发,HT的性别差异更大。2.GD和HT各型中淋巴细胞浸润程度呈现连续性的变化,即GDⅢ型>GDⅡ型>GDⅠ型,HT-P型>HT-O型>HT-L型,CK-19、VEGF-C、COX-2阳性表达率和阳性表达强度亦有同样的变化趋势,提示这三种指标在ATID中的表达水平与其淋巴细胞浸润程度有关。Vimentin在GD和HT各型中的阳性表达率均为100%,且阳性表达强度相近,与其淋巴细胞浸润程度无关。3.GD中61.4%病例VEGF-C和COX-2表达一致,但两者无相关关系,HT中93.1%的病例VEGF-C和COX-2表达一致,两者在HT中的表达呈正相关关系。HT相对于GD有更多的淋巴细胞浸润,提示在HT中COX-2似乎也能上调VEGF-C的表达,促进淋巴细胞由血管和淋巴管迁移到甲状腺组织,加重组织的淋巴细胞浸润和破坏。4.综合检测CK-19、VEGF-C、COX-2和Vimentin对于GD、HT的诊断、治疗、疾病监测、评估预后等具有重要的临床意义。GD、HT中CK-19、VEGF-C、COX-2和Vimentin各指标在疾病发展中的作用及它们之间的具体关系有待于进一步研究。5. RT-PCR结果显示ER在HT、甲状腺乳头状癌和结节性甲状腺肿中均有一定程度的表达,实时定量结果分析显示HT中的表达量较高,但三者间ER的表达量的差别没有统计学意义。ER在HT、甲状腺乳头状癌和结节性甲状腺肿中表达,雌激素通过作用于ER而发挥相应的生物学作用,因此雌激素与这三种甲状腺疾病的发病及病情进展有密切的关系,尤其是与HT的关系更密切。PR在HT、甲状腺乳头状癌和结节性甲状腺肿三种疾病中未检测到表达,可能的原因是这三种甲状腺疾病不表达PR。