SARS-CoV免疫噬菌体抗体库的构建及筛选

论文题目: SARS-CoV免疫噬菌体抗体库的构建及筛选

论文类型: 博士论文

论文专业: 细胞生物学

作者: 李郁

导师: 陈志南

关键词: 严重急性呼吸综合征,刺突蛋白,噬菌体抗体

文献来源: 第四军医大学

发表年度: 2005

论文摘要: 严重呼吸窘迫综合症(SARS)常常是致命性的呼吸道疾病,该疾病由新的SARS冠状病毒引起。2002-2003年,该疾病在世界范围内流行,此后,可能是因为与携带病毒的动物接触,在我国南部持续出现散在的病例。2004年,在我国出现了两个实验室感染的病例并在公众中传播,引发了大范围的病源追踪,病源接触者的隔离以防止新的流行。这说明SARS疾病在未来还是有复发的可能,所以,还是有必要发展一些通过主动或被动免疫以控制SARS冠状病毒感染的方法。本研究利用噬菌体表面呈现技术,以SARS-CoV刺突蛋白(S)RBD为抗原,筛选获得其人源抗体,一方面将对SARS疾病的特异性预防,治疗和诊断提供新的途径,同时也提示SARS-CoV亚单位疫苗可以用于SARS疾病的预防。本实验共分为四个部分内容: 第一部分:SARS-CoV刺突蛋白(spike,S)受体结合区(receptor binding region, PSD)的原核表达我们采取原核表达的方式,表达了SARS—CoV S RBD的193个氨基酸,主要目的是选取这一段进行人源抗体的筛选将减少其它非中和位点的干扰,能更有效地筛选到中和抗体。首先用RT—PCR扩增SARS-CoV srbd基因,经Nde Ⅰ和Xho Ⅰ酶切后插入原核表达载体PET30b(+),IPTG诱导表达后用以HiS-Tag亲和层析纯化表达产物,用SARS病人恢复期血清进行ELISA和Western blot鉴定。结果显示RT—PCR扩增得到一570bp左右的DNA片断;插入PET30b(+)后经酶切及测序证实为SARS-CoV s

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正文

1 SARS-CoV刺突蛋白受体结合区的原核表达

1.1 试验材料

1.2 方法与步骤

1.3 结果

1.4 讨论

2 SARS—CoV人源Fab免疫噬菌体抗体库的构建

2.1 试验材料

2.2 方法与步骤

2.3 结果

2.4 讨论

3 人源抗SARS—CoV S RBD Fab抗体的筛选

3.1 试验材料

3.2 方法与步骤

3.3 结果

3.4 讨论

4 高潜在中和性人源Fab抗体的筛选

4.1 试验材料

4.2 方法与步骤

4.3 结果

4.4 讨论

小结

参考文献

个人简历和研究成果

致谢

附录

发布时间: 2005-07-19

参考文献

[1].猪源噬菌体抗体库的构建与抗PRRSV抗体的筛选[D]. 辛英豪.华中农业大学2018
[2].人源性全套噬菌体抗体库的构建以及抗汉坦病毒抗体的筛选与表达[D]. 侯颖春.第四军医大学1997
[3].大容量天然噬菌体抗体库的建立、筛选及抗DR5抗体的鉴定[D]. 王辉.中国人民解放军军事医学科学院2008
[4].人源化单链抗体噬菌体库的构建及抗TNF-α抗体的筛选[D]. 刘运超.天津大学2012
[5].抗牛精子膜蛋白单链抗体基因的克隆与表达[D]. 杨树洪.中国农业大学2004
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