诱导性一氧化氮合酶参与阿尔兹海默病模型鼠病理进程

论文摘要

第一部分诱导性一氧化氮合酶参与阿尔兹海默病模型鼠病理进程研究背景与目的:一氧化氮（NO）作为神经递质具有多种功能,但在病理情况下,大量表达的NO可导致神经损伤。中枢神经系统内的NO主要由神经元型一氧化氮合酶（nNOS）和诱导性一氧化氮合酶（iNOS）合成。近期研究提示iNOS参与了阿尔兹海默病（AD）的发病进程。本实验室既往研究证实长期D-半乳糖注射结合双侧卵巢切除是一种复合因素AD动物模型。本学位论文拟进一步研究iNOS是否参与该AD模型的病理进程。方法和结果:成年雌性ICR小鼠行双侧卵巢摘除,术后腹腔注射D-半乳糖100mg/kg/d,持续8周,进行下列研究,结果如下:1.生化结果显示,与对照组相比,模型组脑内NO生成量增高,iNOS活性增高,nNOS活性下降;Western blot结果显示模型组iNOS表达量上调,而nNOS表达量下调。2.免疫组化结果显示,与对照组相比,模型组海马和大脑皮层IBa1阳性小胶质细胞和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）阳性星形胶质细胞数目和活化比例明显增多。3.免疫荧光及双标染色结果显示,模型组部分MAC-1阳性小胶质细胞和血管周围GFAP阳性星形胶质细胞共表达iNOS,并可见神经元样细胞也表达iNOS,而对照组未见明显共表达免疫荧光信号。结论:D-半乳糖注射结合内源性卵巢激素剥夺AD模型小鼠脑中存在iNOS表达增高,这种表达增高来源于激活的小胶质细胞、血管周围活化的星形胶质细胞以及神经元细胞。第二部分谷氨酸能神经元和星形胶质细胞参与福尔马林诱导的急性疼痛传递研究背景与目的:谷氨酸作为中枢神经系统内主要的兴奋性递质具有多种神经功能;星形胶质细胞通过谷氨酸-谷氨酰胺循环调节突触间隙谷氨酸浓度,从而参与谷氨酸神经传递过程。既往研究显示脊髓后角谷氨酸能神经元和星形胶质细胞参与福尔马林诱导的痛觉传递。在此研究基础上,本实验拟进一步研究谷氨酸能神经元以及星形胶质细胞是否参与以及如何参与中枢痛觉传递。方法与结果:ICR小鼠右后足背面皮下注射2.5%的福尔马林40μl后,进行下列研究,结果如下:1.行为学测试显示,模型组疼痛行为持续时间明显高于对照组。2. c-Fos/谷氨酸双标染色结果证实模型组在脊髓后角、丘脑腹后外侧核和大脑感觉皮层均可见c-Fos/谷氨酸双标染色细胞,而在对照组谷氨酸阳性细胞内未见明显c-Fos表达。3.胶质纤维酸性蛋白免疫荧光染色显示,相比于对照组,模型组脊髓后角胞体肥大的活化星形胶质细胞比例明显增多,但丘脑腹后外侧核和大脑感觉皮层星形胶质细胞活化不明显。4.脊髓后角免疫组化染色、免疫印迹及光密度分析结果显示,与对照组相比,模型组脊髓后角谷氨酸转运体1、谷氨酸/天冬氨酸转运体、谷氨酰胺合酶和水通道蛋白4表达上调。结论:谷氨酸能神经元在脊髓后角、丘脑腹后外侧核、初级感觉皮层三个水平参与福尔马林诱导的急性疼痛传递。脊髓后角星形胶质细胞通过上调谷氨酸转运体、谷氨酰胺合酶和水通道蛋白4表达,增加对突触间隙中谷氨酸的再摄取,从而参与急性疼痛传递的调节。

论文目录

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英文摘要

第一部分诱导性一氧化氮合酶参与阿尔兹海默病模型鼠病理进程

1. 前言

2. 正文

2.1 材料

2.2 方法

2.3 结果

2.4 讨论

2.5 小结

3. 参考文献

第二部分谷氨酸能神经元和星形胶质细胞参与福尔马林诱导的急性疼痛传递