安徽省两种道地药材的分子鉴定研究

论文摘要

本研究对安徽省两种具有代表性的道地药材蕲蛇和宣木瓜进行分子鉴定研究：（1）通过对蕲蛇药材及其市场收集混伪品的Cyt b基因进行序列测定和分析，结果发现蕲蛇药材存在着混杂现象。蕲蛇药材正品与其市售混伪品的Cyt b基因序列有着显著差异，该序列在蕲蛇药材种内差异率为0～0．91％，与混伪品间的差异率为18．57％～23．78％。（2）同时，在对蕲蛇药材及其混伪品药材的Cyt b基因片段的序列分析基础上，设计了用于蕲蛇药材PCR鉴别的一对高度特异性引物qsJB11和qsJBh1。用该鉴别引物扩增蕲蛇药材及其混伪品的模板DNA时，只有蕲蛇药材DNA模板能得到特异性阳性扩增，其余样品为阴性，最佳退火64℃。所设计的鉴别引物对蕲蛇药材有高度特异性，该PCR鉴别方法可准确、稳定、可靠地用于蕲蛇药材的鉴别。（3）通过检测AFLP分析中DNA提取、酶切及连接、预扩增和选择性扩增的结果，对影响AFLP分析的主要因子进行分析，建立并优化了宣木瓜AFLP分析体系。筛选出E—ACA+M—CAA引物组合，应用该对引物组合对来源于不同产地的宣木瓜供试材料进行了道地性初步分析，所获条带清晰可辩，道地性产区宣木瓜药材的特异性差异带明显，为研究木瓜的道地性和遗传多样性提供了技术基础。（4）测定了宣木瓜ITS基因序列，全长共594bp，GenBank比序与皱皮木瓜（Chaenomeles speciosa）同源性达95％（AF186530）。

论文目录

• 摘要
• 英文摘要
• 第一章 引言
• 1. 中药分子鉴定的研究背景
• 2. 中药鉴定的一般方法
• 2.1 组织学方法
• 2.2 化学方法
• 2.3 生物化学方法
• 3. 中药分子鉴定的方法
• 3.1 分子标记技术
• 3.1.1 RFLP技术
• 3.1.2 RAPD技术
• 3.1.3 AFLP技术
• 3.1.4 微卫星技术
• 3.2 DNA序列测定
• 3.2.1 DNA序列分子鉴定的原理与方法
• 3.2.2 用于中药材分子鉴定的基因片段
• 3.2.3 在DNA测序鉴定基础上发展的特异性PCR鉴别
• 4. 中药分子鉴定的应用前景
• 第二章 蕲蛇药材及其市售混伪品的Cyt b基因序列分析及PCR鉴别
• 1. 前言
• 2. 材料和方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 样品
• 2.1.2 主要仪器
• 2.1.3 主要试剂
• 2.2 方法
• 2.2.1 蕲蛇DNA的提取
• 2.2.2 PCR扩增
• 2.2.3 DNA测序
• 2.2.4 PCR鉴别
• 3. 结果
• 3.1 Cyt b基因片段在所收集样本中的PCR扩增
• 3.2 蕲蛇药材正品及其市场收集样品的Cyt b基因片段的序列
• 3.3 蕲蛇与其混伪品的Cyt b基因片段的序列分析
• 3.4 蕲蛇与其伪品的聚类分析图
• 3.5 PCR鉴别结果
• 4. 讨论
• 第三章 宣木瓜AFLP银染技术体系的建立及道地性的初步分析
• 1. 前言
• 2. 材料和方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 样品
• 2.1.2 主要仪器
• 2.1.3 主要试剂
• 2.1.4 缓冲液和常用试剂的配制
• 2.2 方法
• 2.2.1 木瓜DNA的提取
• 2.2.2 DNA浓度与质量测定
• 2.2.3 宣木瓜ITS基因测序
• 2.2.4 酶切连接体系
• 2.2.5 预扩增体系
• 2.2.6 选择性扩增体系
• 2.2.7 聚丙烯酰胺凝胶（6%）电泳和银染检测
• 3. 结果
• 3.1 模板DNA的检测
• 3.2 宣木瓜ITS基因测序结果
• 3.3 限制性消化与连接反应
• 3.4 预扩增反应
• 3.5 选择性扩增反应
• 3.6 电泳及银染
• 3.7 宣木瓜道地性的初步分析
• 4. 讨论
• 第四章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介