论文摘要
随着严重急性呼吸道综合征（severe acute respiratory syndrome, SARS）的出现,对SARS冠状病毒（SARS coronavirus, SARS-CoV）的研究已取得了突飞猛进的发展。许多研究表明SARS-CoV的S蛋白（spike protein）在病毒的感染过程中起了重要作用,它在病毒与宿主细胞表面受体结合及导膜融合进入细胞的过程中,起关键的作用,是冠状病毒的主要抗原。人们发现冠状病毒S蛋白可以分为S1和S2两部分,其中S1是参与冠状病毒识别细胞受体的主要部分,是SARS-CoV与细胞受体结合的部位。因此,本课题主要是对S1进行研究。我们利用Nco I和HindⅢ两种酶对pcDNA3-S1质粒进行双酶切,获得目的基因片段,再将目的基因片段与用相同酶切的pPelB质粒载体连接,重组质粒转化大肠杆菌Rosetta,然后在适宜条件下用IPTG诱导可溶性表达。收集菌体,利用SDS-PAGE和Western blot进行初步鉴定,并进行了免疫学活性检测。在验证了表达产物具有活性后进行大量表达,所获得的产物利用金属螯合亲和层析进行纯化。结果表明我们成功地在大肠杆菌中表达了S1蛋白片段并可以利用金属螯合亲和层析纯化方法对表达产物进行纯化,得到相对较纯的重组蛋白。
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