骨髓间质干细胞免疫调节作用的实验研究

论文摘要

目的:研究骨髓间质干细胞体内外免疫调节的作用及其机制。 方法:从胚胎及Wistar大鼠股骨中分离培养间质干细胞,经克隆化分选出形态均一的细胞,用流式细胞术检测其表面标志以鉴定其纯度。将分离培养的骨髓间质干细胞接种于96孔板,待其长满孔面积的80%～90%时用直线加速器以30GY剂量照射,然后与分离的外周血淋巴细胞共培养3d,以单独培养的淋巴细胞为对照,加入ConA刺激68h,分别使用MTT法和3H-TdR法检测MSCs对外周血淋巴细胞增殖反应的影响。采用RT-PCR和Real-time PCR检测经MSCs处理的人外周血淋巴细胞TGF-β1、IL-6、IL-8、IL-10的基因表达,以未经MSCs处理的同一人外周血淋巴细胞标本作对照。将SD大鼠的真皮移植到Wistar大鼠创口上,加压包扎,同时将2×106的Wistar大鼠MSCs经尾静脉注射到Wistar大鼠体内,以经同样手术处理而不注射MSCs的Wistar人鼠为对照。无菌分离Wistar大鼠外周血及脾脏淋巴细胞,并用Wistar大鼠MSCs及ConA处理,以ConA单独处理的Wistar大鼠淋巴细胞为对照。将2×106的MSCs在不同的时间点经尾静脉注射到Wistar大鼠体内,在每次注射前经尾静脉采血测定外周血中CD4+、CD8+淋巴细胞占整个淋巴细胞数量的比值。 结果:MSCs对ConA刺激的淋巴细胞增殖的影响与MSCs和淋巴细胞的比值有关,当比值较大时MSCs对ConA刺激的淋巴细胞增殖有明显的抑制作用,但是比值较小时反而会促进其增殖。MSCs对淋巴

论文目录

• 第一章 绪论
• 1.1 间质干细胞免疫调节作用的研究进展
• 1.1.1 MSC的来源及其生物学特性
• 1.1.2 MSC的免疫调节作用
• 1.1.3 MSC对于免疫系统细胞的作用
• 1.1.4 MSC免疫调节的作用机制
• 1.1.5 MSC与自身免疫性疾病
• 1.1.6 MSC免疫调节作用的动物实验及临床研究
• 1.2 本论文研究的目的、方法、实验方案的设计、意义
• 第二章 MSC对conA刺激的PBLs增殖的抑制作用
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 方法
• 2.1.3 统计学方法
• 2.2 结果
• 2.2.1 MSCs的分离、培养和鉴定
• 2.2.2 MTT法测定MSCs对外周血淋巴细胞增殖反应的影响
• 3H-TdR掺入法测定MSCs对外周血淋巴细胞增殖反应的影响'>2.2.3³H-TdR掺入法测定MSCs对外周血淋巴细胞增殖反应的影响
• 2.3 讨论
• 2.4 小结
• 第三章 MSCs对PBLs分泌IL-8、IL-10及TGF-β的影响
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 材料
• 3.1.2 方法
• 3.1.3 统计学方法
• 3.2 结果
• 3.2.1 Real-Time PCR测定GAPDH的表达
• 3.2.2 RT-PCR和Real-Time PCR检测细胞因子TGF-β1、IL-8、IL-10的表达
• 3.3 讨论
• 3.4 小结
• 第四章 MSC下调免疫应答的动物实验研究
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 材料
• 4.1.2 方法
• 4.1.3 统计学方法
• 4.2 结果
• 4.2.1 Wistar大鼠MSCs的分离、培养以及鉴定
• 4.2.2 皮肤移植动物模型
• 4.2.3 流式细胞仪测定Wistar大鼠外周血CD4+、CO8+PBLs
• 4.3 讨论
• 4.4 小结
• 第五章 主要结论和展望
• 5.1 主要结论
• 5.2 展望
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表的文章