本文主要研究内容
作者张亚（2019）在《禽β-防御素7和10抗三种病毒感染研究》一文中研究指出：J亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup J,ALV-J)、马立克氏病病毒(Marek’s disease virus,MDV)、猪圆环病毒病毒2型(Porcine circovirus 2,PCV2)这三种病毒都可以引起被感染动物免疫抑制,造成动物机体免疫力下降,从而利于其它病原菌的入侵,引起两种或多种疾病的并发感染,增加了诊断和治疗的难度。目前MDV与PCV2主要通过接种疫苗来进行防控,虽然在一定程度上减少了疾病的发生,但同时也加剧了毒株的变异速度。ALV-J主要通过淘汰方式来进行净化,但2018年中国几个省份几乎同时爆发由ALV-J引起的髓细胞瘤病,使得ALV-J的净化之路愈发艰巨。而抗生素添加剂的使用严重破坏了动物肠道的微生态平衡,药物残留也影响了畜产品的品质和人类健康。因此,急需开发出一种无毒副作用又不会使病原菌产生耐药性的药物来解决这一问题。防御素具广谱抗微生物活性,能有效地杀灭病毒、细菌、真菌、螺旋体等病原微生物,对肿瘤细胞也有细胞毒作用,且迄今尚未发现有致病菌株对其产生耐药性。许多证据表明,防御素对囊膜病毒有显著抑制作用。β-防御素是禽类中唯一的防御素,目前已经发现的禽β-防御素已经超过25种,而鸡β-防御素有14种。鸡β-防御素在鸡体内分布十分广泛,几乎存在于鸡的各个组织器官中。为研究鸡β-防御素的抗病毒作用,本研究根据鸡β-防御素在鸡体内分布情况以及其特性等从14种鸡β-防御素中挑选鸡β-防御素7(Av BD7)、鸡β-防御素10(Av BD10)进行抗ALVJ、MDV、PCV2作用研究。本研究采用基因克隆的方法,分别从鸡的肝脏、睾丸组织中扩增得到Av BD7、Av BD10基因,将两种基因亚克隆到表达载体p ET-32a上,构建重组质粒,将重组质粒转化至BL21表达菌中,用IPTG进行诱导表达,超声破碎诱导后菌体,并离心取上清和沉淀进行检测。结果表明,在破碎菌体的上清和沉淀中均有目的蛋白表达。用镍柱法对表达的重组蛋白进行纯化得到Av BD7、Av BD10蛋白。首先在体外验证这两种蛋白的抗病毒作用,具体方法为:培养DF-1/PK-15细胞,接种ALV-J、MDV和PCV2,确定细胞感染病毒后,接入适宜浓度的Av BD7、Av BD10蛋白,培养一段时间后,q PCR和western blot检测不同试验组病毒载量和蛋白表达量的变化。结果发现,Av BD7、Av BD10蛋白对MDV有较好的抑制效果,而对ALV-J和PCV2的抑制效果不明显。为进一步验证Av BD7、Av BD10蛋白的抗MDV作用,本试验设计并进行了体内试验,体内试验共分为6个组,分别为MDV、MDV+Av BD7、MDV+Av BD10、Av BD7、Av BD10以及Normal,其中Normal组接入与防御素蛋白同等剂量的咪唑。前三个组在雏鸡3日龄时接种MDV,后三组不做处理。确定接毒成功后,根据组别分别注射相应的蛋白和咪唑。最后统一剖杀处理,分别从大体剖检病变观察、血液学观察以及组织病理学观察对不同组别进行症状分析。大体剖检病变结果显示MDV感染组鸡的脾脏、胸腺、法氏囊有一定程度的萎缩,腺胃有轻度的纤维素性渗出,肝脏可见白色点状灶,其它组织器官则相对正常;另外三组没有出现明显的眼观病变。血液学观察结果显示病毒感染组血液中炎性细胞数量增多,主要是淋巴细胞增多,两个防御素治疗组的血液中,也有少量炎性细胞存在。组织病理学观察结果显示3个感染MDV组鸡的肝脏中均有炎性灶出现,而且MDV组最严重;MDV感染组腺胃的腺管间出现炎性细胞浸润,另外几组炎症反应较轻微;MDV感染组的肾脏有大的炎性灶,MDV+Av BD7和MDV+Av BD7组的肾脏肾小管上皮细胞轻度空泡变性。综上所述,体内注射Av BD7/Av BD10能够减轻MDV感染所造成的病理损伤。本研究运用原核表达载体pET-32a成功建立AvBD7、AvBD10体外表达方法。体外试验探索Av BD7、Av BD10对三种引起免疫抑制的病毒(ALV-J、MDV、PCV2)的抵抗作用,体内试验探索对MDV的抵抗作用。本研究结果丰富了对鸡β-防御素功能的认识,为开发新型抗病毒类药物提供了理论依据。
Abstract
Jya qun qin bai xie bing bing du (Avian leukosis virus subgroup J,ALV-J)、ma li ke shi bing bing du (Marek’s disease virus,MDV)、zhu yuan huan bing du bing du 2xing (Porcine circovirus 2,PCV2)zhe san chong bing du dou ke yi yin qi bei gan ran dong wu mian yi yi zhi ,zao cheng dong wu ji ti mian yi li xia jiang ,cong er li yu ji ta bing yuan jun de ru qin ,yin qi liang chong huo duo chong ji bing de bing fa gan ran ,zeng jia le zhen duan he zhi liao de nan du 。mu qian MDVyu PCV2zhu yao tong guo jie chong yi miao lai jin hang fang kong ,sui ran zai yi ding cheng du shang jian shao le ji bing de fa sheng ,dan tong shi ye jia ju le du zhu de bian yi su du 。ALV-Jzhu yao tong guo tao tai fang shi lai jin hang jing hua ,dan 2018nian zhong guo ji ge sheng fen ji hu tong shi bao fa you ALV-Jyin qi de sui xi bao liu bing ,shi de ALV-Jde jing hua zhi lu yu fa jian ju 。er kang sheng su tian jia ji de shi yong yan chong po huai le dong wu chang dao de wei sheng tai ping heng ,yao wu can liu ye ying xiang le chu chan pin de pin zhi he ren lei jian kang 。yin ci ,ji xu kai fa chu yi chong mo du fu zuo yong you bu hui shi bing yuan jun chan sheng nai yao xing de yao wu lai jie jue zhe yi wen ti 。fang yu su ju an pu kang wei sheng wu huo xing ,neng you xiao de sha mie bing du 、xi jun 、zhen jun 、luo xuan ti deng bing yuan wei sheng wu ,dui zhong liu xi bao ye you xi bao du zuo yong ,ju qi jin shang wei fa xian you zhi bing jun zhu dui ji chan sheng nai yao xing 。hu duo zheng ju biao ming ,fang yu su dui nang mo bing du you xian zhe yi zhi zuo yong 。β-fang yu su shi qin lei zhong wei yi de fang yu su ,mu qian yi jing fa xian de qin β-fang yu su yi jing chao guo 25chong ,er ji β-fang yu su you 14chong 。ji β-fang yu su zai ji ti nei fen bu shi fen an fan ,ji hu cun zai yu ji de ge ge zu zhi qi guan zhong 。wei yan jiu ji β-fang yu su de kang bing du zuo yong ,ben yan jiu gen ju ji β-fang yu su zai ji ti nei fen bu qing kuang yi ji ji te xing deng cong 14chong ji β-fang yu su zhong tiao shua ji β-fang yu su 7(Av BD7)、ji β-fang yu su 10(Av BD10)jin hang kang ALVJ、MDV、PCV2zuo yong yan jiu 。ben yan jiu cai yong ji yin ke long de fang fa ,fen bie cong ji de gan zang 、gao wan zu zhi zhong kuo zeng de dao Av BD7、Av BD10ji yin ,jiang liang chong ji yin ya ke long dao biao da zai ti p ET-32ashang ,gou jian chong zu zhi li ,jiang chong zu zhi li zhuai hua zhi BL21biao da jun zhong ,yong IPTGjin hang you dao biao da ,chao sheng po sui you dao hou jun ti ,bing li xin qu shang qing he chen dian jin hang jian ce 。jie guo biao ming ,zai po sui jun ti de shang qing he chen dian zhong jun you mu de dan bai biao da 。yong nie zhu fa dui biao da de chong zu dan bai jin hang chun hua de dao Av BD7、Av BD10dan bai 。shou xian zai ti wai yan zheng zhe liang chong dan bai de kang bing du zuo yong ,ju ti fang fa wei :pei yang DF-1/PK-15xi bao ,jie chong ALV-J、MDVhe PCV2,que ding xi bao gan ran bing du hou ,jie ru kuo yi nong du de Av BD7、Av BD10dan bai ,pei yang yi duan shi jian hou ,q PCRhe western blotjian ce bu tong shi yan zu bing du zai liang he dan bai biao da liang de bian hua 。jie guo fa xian ,Av BD7、Av BD10dan bai dui MDVyou jiao hao de yi zhi xiao guo ,er dui ALV-Jhe PCV2de yi zhi xiao guo bu ming xian 。wei jin yi bu yan zheng Av BD7、Av BD10dan bai de kang MDVzuo yong ,ben shi yan she ji bing jin hang le ti nei shi yan ,ti nei shi yan gong fen wei 6ge zu ,fen bie wei MDV、MDV+Av BD7、MDV+Av BD10、Av BD7、Av BD10yi ji Normal,ji zhong Normalzu jie ru yu fang yu su dan bai tong deng ji liang de mi zuo 。qian san ge zu zai chu ji 3ri ling shi jie chong MDV,hou san zu bu zuo chu li 。que ding jie du cheng gong hou ,gen ju zu bie fen bie zhu she xiang ying de dan bai he mi zuo 。zui hou tong yi pou sha chu li ,fen bie cong da ti pou jian bing bian guan cha 、xie ye xue guan cha yi ji zu zhi bing li xue guan cha dui bu tong zu bie jin hang zheng zhuang fen xi 。da ti pou jian bing bian jie guo xian shi MDVgan ran zu ji de pi zang 、xiong xian 、fa shi nang you yi ding cheng du de 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yuan he biao da zai ti pET-32acheng gong jian li AvBD7、AvBD10ti wai biao da fang fa 。ti wai shi yan tan suo Av BD7、Av BD10dui san chong yin qi mian yi yi zhi de bing du (ALV-J、MDV、PCV2)de di kang zuo yong ,ti nei shi yan tan suo dui MDVde di kang zuo yong 。ben yan jiu jie guo feng fu le dui ji β-fang yu su gong neng de ren shi ,wei kai fa xin xing kang bing du lei yao wu di gong le li lun yi ju 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自山东农业大学的张亚，发表于刊物山东农业大学2019-07-08论文，是一篇关于抑制论文,亚群禽白血病病毒论文,马立克氏病毒论文,猪圆环病毒型论文,山东农业大学2019-07-08论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自山东农业大学2019-07-08论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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