彭泽鲫鱼新型抗菌肽基因的筛选和研究

论文摘要

抗菌肽是特定基因编码产生的一类小分子多肽,结构和组成复杂多样,是生物天然免疫的重要组成部分。抗菌肽因具有独特的抗菌机制、广谱的杀菌作用、高效的抗菌活性以及靶菌株难以产生抗性等优点而倍受关注。近年来抗菌肽的开发与应用已经成为研究的热点。目前,在多个物种（如昆虫、哺乳动物、两栖动物等）中都发现了大量抗菌肽,而淡水鱼类中发现的抗菌肽并不是很多。本实验的目的是分离和研究新的鱼类抗菌肽基因,并对抗菌肽结构、功能和作用机理进行分析,为后续的新型抗菌肽的设计和表达奠定基础。为得到抗菌肽基因序列,我们先用嗜水气单胞菌诱导彭泽鲫鱼产生免疫反应,并提取鱼肝脏的RNA,接着通过DDRT-PCR找到差异条带,选择150bp左右的差异条带进行扩增并测序,然后根据测序结果设计引物用RACE的方法找到差异片段所在基因的全长。我们用2条锚定引物和8条随机引物组合进行DDRT-PCR,找到多条差异条带,选取了最有可能的条带进行测序,最后得到了4条序列（CF-1、CF-2、CF-3、CF-4）。序列比对分析表明,CF-1和CF-2在进化中较保守,广泛存在于不同的生物中。CF-4在Otolemur garnetti中有同源序列。这三条序列的功能目前尚未报道,它们可能是彭泽鲫鱼中存在的新的抗菌肽基因序列。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第1章 前言
• 第一节 抗菌肽的来源
• 1 节肢动物抗菌肽
• 2 鱼类抗菌肽
• 3 哺乳动物抗菌肽
• 4 两栖类动物抗菌肽
• 5 植物抗菌肽
• 6 其他抗菌肽
• 第二节 抗菌肽的结构、物化性质和分类
• 1 抗菌肽的结构和物化性质
• 2 抗菌肽的分类
• 第三节 抗菌肽的作用机制
• 1 细胞膜攻击作用
• 2 免疫调节作用
• 3 诱导细胞凋亡
• 4 线粒体攻击作用
• 5 对细胞核染色体的影响
• 6 对癌细胞骨架的断裂作用
• 7 抑制蛋白质及细胞壁合成
• 第四节 抗菌肽的作用特点
• 1 广谱性
• 2 选择性毒性
• 3 高效性
• 4 稳定性
• 5 快速杀菌能力
• 6 和免疫系统的相互作用
• 7 环境因素的影响
• 第五节 抗菌肽的应用
• 1 在医药方面的应用
• 2 在农业上的应用
• 3 在基因工程上的应用
• 4 在食品方面的应用
• 第六节 细菌对抗菌肽的耐药性
• 第七节 本课题的研究目的、意义
• 第2章 材料与方法
• 第一节 材料和仪器
• 1 彭泽鲫鱼和嗜水气单胞菌
• 2 主要的仪器和设备
• 3 PCR引物
• 4 主要酶和试剂
• 5 主要缓冲液和试剂的成分及配制
• 6 主要培养基
• 第二节 实验方法
• 1 实验技术路线
• 2 鱼的免疫
• 3 鱼肝总RNA的提取
• 4 差异显示PCR（DDRT-PCR）
• 5 获取全长序列
• 第3章 结果与分析
• 第一节 DDRT-PCR
• 1 RNA提取质量
• 2 差异条带的查找
• 第二节 全长序列
• 第4章 讨论与总结
• 1 降低差异显示PCR假阳性和提高重复性
• 2 分离和鉴定鱼类抗菌肽的重要意义
• 3 抗菌肽研究和开发的现状
• 4 后续工作
• 致谢
• 参考文献
• 攻读学位期间的研究成果