重组白细胞介素-2（IL-2）对固始鸡免疫机能和分泌型免疫球蛋白（SIgA）表达影响的研究

论文摘要

本研究以固始鸡作为试验材料,用不同剂量的重组白细胞介素-2（IL-2）配合志贺氏菌灭活苗对固始鸡进行分组免疫接种,在免疫前和免疫后不同时期对固始鸡血清内抗体效价和免疫器官指数进行了测定;利用免疫组织化学染色技术和Qwin图像处理系统,对固始鸡肠道黏膜内SIgA表达情况进行观察和定量分析,从而探讨了IL-2对固始鸡的免疫机能和免疫器官生长发育的影响。结果表明:（1）志贺氏菌疫苗配合IL-2进行免疫的试验组,免疫后固始鸡血清内抗体水平高于志贺氏菌疫苗免疫组和空白对照组,在免疫后第2周差异显著（p﹤0.05）。（2）注射IL-2的各试验组的固始鸡的脾脏、胸腺和法氏囊的指数均大于志贺氏菌疫苗免疫组和空白对照组,有时差异显著（p﹤0.05）。（3）SIgA主要表达于固始鸡肠黏膜固有层分泌细胞膜上,分泌细胞有的位于肠绒毛内,有的位于肠腺腺腔周围。SIgA也有以片层状或线状分布于肠腺腺腔内。随免疫后时间的延长,SIgA表达量明显增多。（4）在十二指肠中,SIgA主要表达于肠腺周围和黏膜与肠绒毛内的固有层内。免疫后随时间的延长,表达量逐渐增加。注射白介素的试验组中十二指肠中SIgA的表达量多于空白对照组和志贺氏菌疫苗免疫组。在注射白介素的试验组中当添加量为50μg时SIgA表达量最多。空肠中SIgA主要分布于肠腺之间和黏膜固有层内。志贺氏菌疫苗+IL-2（50μg）组中空肠内SIgA表达量增多的快,而且多于其他各组。回肠中SIgA主要分布在绒毛内的固有层中,多以颗粒状存在。在注射白介素的试验组SIgA在回肠的表达量显著多于空白对照组和志贺氏菌疫苗组,而且注射量为50μg时表达量最多。盲肠扁桃体内,在免疫后随时间延长SIgA主要以团簇状、三角锥形、短杆状分布于肠绒毛固有层及肠腺腺腔的周围。志贺氏菌疫苗+IL-2使SIgA的表达量显著高于空白对照组和志贺氏菌疫苗免疫组。志贺氏菌疫苗+IL-2（50μg）组中盲肠扁桃体内SIgA表达量最多。在卵黄囊憩室中,SIgA主要分布于肠绒毛基底部附近的固有层内。志贺氏菌疫苗+IL（50μg）组SIgA的表达量最多。在直肠内,以肠腺腺腔内分布的SIgA的较多。各试验组中志贺氏菌疫苗+IL（50μg）组SIgA的表达量最多。（5）肠道内SIgA一般随免疫时间的延长而表达量逐渐增多,到免疫后第4周时,表达量达到高峰值,随后缓慢下降。（6）免疫后1周,注射IL-2的试验组盲肠扁桃体内SIgA的表达量最多。而在空白对照组和志贺氏菌疫苗免疫组中,卵黄囊憩室中的SIgA的表达量最大。免疫后第2周,各试验组SIgA的最大表达量出现在不同的器官:在空白对照组是在卵黄囊憩室;在志贺氏菌疫苗免疫组和志贺氏菌疫苗+IL-2（250μg）组是在盲肠扁桃体;在志贺氏菌疫苗+IL-2（10μg）组和志贺氏菌疫苗+IL-2（50μg）组则出现在回肠中。免疫后3-7周,盲肠扁桃体中的SIgA表达量最大。（7）志贺氏菌疫苗配合注射IL-2（50μg）使器官的SIgA表达量最大。本研究结果表明,重组鸡IL-2可明显促进固始鸡免疫器官生长发育,提高体液免疫水平,同时也有利于SIgA在固始鸡肠道内的表达。研究结果提示IL-2与疫苗配合使用,可作为佐剂提高疫苗的免疫原性,增强机体免疫力。

论文目录

• 致谢
• 摘要
• 1 文献综述
• 1.1 鸡的免疫系统
• 1.1.1 鸡的免疫系统组成
• 1.1.2 鸡的黏膜免疫系统
• 1.1.3 鸡的黏膜免疫细胞
• 1.1.3.1 微皱褶细胞
• 1.1.3.2 专职抗原提呈细胞
• 1.1.3.3 肠上皮细胞
• 1.1.3.4 上皮内淋巴细胞
• 1.1.3.5 固有层淋巴细胞
• 1.1.4 鸡黏膜免疫系统的特点
• 1.1.5 鸡的黏膜免疫系统功能
• 1.1.5.1 非特异性免疫功能
• 1.1.5.2 特异性免疫功能
• 1.1.6 鸡黏膜免疫基本过程
• 1.2 分泌型免疫球蛋（SIgA）
• 1.2.1 鸡 SIgA 的结构及存在形式
• 1.2.2 SIgA 的合成、运输和分泌
• 1.2.3 SIgA 的合成和分泌调节
• 1.2.3.1 T 淋巴细胞和细胞因子
• 1.2.3.2 抗原
• 1.2.3.3 激素
• 1.2.4 SIgA 与感染
• 1.2.5 SIgA 的抗感染机制
• 1.2.6 SIgA 的检测方法
• 1.2.7 鸡SIgA 的纯化
• 1.3 影响黏膜免疫的因素
• 1.3.1 乳酸杆菌、CpGDNA、重组 IL-2、氟化钠和大豆黄酮的影响
• 1.3.2 益生菌的影响
• 1.3.3 锌硒互作的影响
• 1.3.4 半胱胺的影响
• 1.3.5 谷胺酰胺的影响
• 1.3.6 睡眠剥夺的影响
• 1.3.7 胃肠神经肽对黏膜免疫的调节
• 1.4 黏膜免疫佐剂
• 1.4.1 细菌性物质
• 1.4.2 细胞因子
• 1.4.3 抗原递送系统
• 1.5 白细胞介素-2
• 1.5.1 白细胞介素-2 的产生
• 1.5.2 白细胞介素-2 的理化性质与分子结构
• 1.5.3 白细胞介素-2 的生物学活性
• 1.5.4 IL-2 的种属特异性
• 1.5.5 IL-2 的受体结构与功能
• 1.5.6 IL-2 的cDNA 克隆
• 1.5.7 鸡 IL-2 的纯化与生化活性
• 1.5.8 IL-2 的应用
• 1.5.8.1 作为免疫治疗剂
• 1.5.8.2 构建新型基因工程疫苗
• 1.5.8.3 作为免疫佐剂
• 1.5.9 临床应用
• 1.5.10 鸡 IL-2 对鸡免疫功能影响的研究
• 1.6 免疫组织化学
• 1.6.1 免疫组织化学的概念
• 1.6.2 标记与标记物
• 1.6.3 免疫组织化学染色方法
• 1.7 志贺氏菌与鸡志贺氏菌病
• 1.7.1 志贺氏菌生物学性状
• 1.7.1.1 形态、染色、培养及生化反应
• 1.7.1.2 抗原结构及分类
• 1.7.1.3 抵抗力
• 1.7.2 致病性
• 1.7.2.1 致病因子
• 1.7.2.2 所致疾病
• 1.7.2.3 免疫性
• 1.7.3 鸡志贺氏菌病
• 2 引言
• 3 材料与方法
• 3.1 试剂与材料
• 3.1.1 试剂
• 3.1.2 材料
• 3.1.3 仪器设备
• 3.2 方法
• 3.2.1 试验动物分组与免疫
• 3.2.2 血清中抗体效价的测定
• 3.2.3 免疫器官生长发育的测定
• 3.2.4 样本采集与组织切片制备
• 3.2.5 石蜡切片的免疫组织化学染色步骤
• 3.2.6 组织学观察与统计
• 4 试验结果
• 4.1 血清中抗体效价的测定结果
• 4.2 免疫器官生长发育的测定结果
• 4.3 固始鸡免疫后不同时期 SIgA 在肠道内表达情况
• 4.3.1 固始鸡免疫后 SIgA 在肠道表达的定性描述
• 4.3.2 免疫后 SIgA 在肠道内的定量表达
• 4.3.2.1 免疫后十二指肠 SIgA 表达面积
• 4.3.2.2 免疫后空肠 SIgA 表达面积
• 4.3.2.3 免疫后回肠 SIgA 表达面积
• 4.3.2.4 免疫后盲肠扁桃体 SIgA 表达面积
• 4.3.2.5 免疫后卵黄囊憩室 SIgA 表达面积
• 4.3.2.6 免疫后直肠 SIgA 表达面积
• 4.4 免疫后同一时期 SIgA 在肠道不同部位的表达量比较
• 4.4.1 免疫后1 周 SIgA 在不同部位的表达量比较
• 4.4.2 免疫后2 周 SIgA 在不同部位的表达量比较
• 4.4.3 免疫后3 周 SIgA 在不同部位的表达量比较
• 4.4.4 免疫后4 周 SIgA 在不同各部位的表达量比较
• 4.4.5 免疫后5 周 SIgA 在不同部位的表达量比较
• 4.4.6 免疫后7 周 SIgA 在不同部位的表达量比较
• 5 讨论
• 5.1 鸡志贺氏菌病及其免疫预防
• 5.2 IL-2 对鸡免疫器官生长发育的影响
• 5.3 SIgA 在肠道内的分布
• 5.4 IL-2 对 SIgA 分泌量的影响
• 5.5 免疫后同一时期不同部位 SIgA 表达量比较
• 6 结论
• 参考文献
• 英文摘要
• 图版