论文摘要
目的:建立一种新的大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E缺氧/复氧模型,为下一步实验选择合适的缺氧/复氧时间点。方法:本实验使用大鼠NRK-52E细胞。实验分为对照组及实验组,实验组分为缺氧2、4和6 h及缺氧后复氧1、12和24 h组。缺氧时换用缺氧液,再置入N294%+O21%+CO25%缺氧环境;缺氧后换用含10%胎牛血清的DMEM/F12,置入空气95%+ CO25%有氧环境,制作缺氧/复氧模型;台盼蓝摄取法进行细胞计数及检测细胞存活率,分光光度法检测培养基中的乳酸脱氢酶（LDH）含量,用流式细胞术（Annexin-V/PI双标记）及TUNEL法检测细胞凋亡。结果:1、台盘蓝活细胞计数大鼠肾小管上皮细胞经过缺氧/复氧处理后,与对照组比较,台盼蓝摄取率显著提高,细胞存活率显著下降;实验组中,复氧后细胞存活率较复氧前明显降低,在R12到达最低值,随之逐渐升高,但是在R24时仍较复氧前降低（P<0.05）。2、LDH检测大鼠肾小管上皮细胞经过缺氧/复氧处理后,LDH含量升高。实验组中,复氧后LDH值较复氧前明显升高（P<0.05）,在R12到达最高值,随之逐渐降低,但是在R24时仍较复氧前高（P<0.05）.3、流式细胞仪检测细胞凋亡大鼠肾小管上皮细胞经过缺氧/复氧处理后,与对照组比较,同时被Annexin V-FITC和碘化丙啶染色的细胞明显增多（P<0.05）,H4/R12细胞凋亡比率最大为21.7%。4、TUNEL法检测大鼠肾小管上皮细胞经过缺氧/复氧处理后,与对照组比较,TUNNEL阳性细胞明显增加（P<0.05）。H4/R12细胞凋亡比率最大为32%。结论:采用三气孵箱法建立大鼠肾小管上皮细胞缺氧/复氧模型,较其他制模方法操作简单、易行、可靠;H4/R12为大鼠肾小管上皮细胞缺氧/复氧模型的最佳时间点。