免疫磁球的制备及其在大肠杆菌检测中的应用

论文摘要

免疫磁球是在表面上包被有抗原或抗体的,具有超顺磁性、大小单一的磁性微球的统称。除了具有磁性外,免疫磁球还具有与靶分子特异性结合的能力。通过在表面包被不同的抗体或抗原,免疫微球可以与样本中的不同物质发生特异性结合,进而达到快速分离富集或者检测的目的。免疫磁球的独特性能使其在环境工程和生物技术领域中具有良好的应用前景。本论文以实验室自制的磁性微球为载体,包被抗体制成免疫磁球。考察了磁性微球类型、抗磁比、包被时间、活化剂以及包被缓冲液类型对免疫磁球上抗体包被量的影响,并对所制备的免疫磁球进行了稳定性评价,确定了免疫磁球制备的最优条件,测定了在最优条件下所制备的免疫磁球上的抗体包被量。最后应用自制的免疫磁球去检测水中大肠杆菌的浓度,确定了检测的工作浓度,灵敏度和检测限,并考察了封闭液和样本离子强度对检测方法的影响。实验结果表明,当载体为聚苯乙烯/丙烯酰胺磁性微球,包被缓冲液为0.1mol/L Tris溶液,抗/磁比为20mg/g,包被时间2h,不使用活化剂时,免疫磁球上交联的抗体量最多,达4.72mg/g;免疫磁球的稳定性评价结果显示,活化剂的使用能够增强免疫磁球的稳定性,但是同时抗体包被量有明显下降;当超声分散前处理磁性微球15min时,与未经处理相比,所制备的免疫磁球稳定性有明显提高。利用自制的免疫磁球,采用夹心法检测大肠杆菌稀释液的浓度。当使用3%牛血清白蛋白做封闭液,在37℃,150rpm的条件下封闭30min后,免疫磁球的信噪比最高,达1.87。菌液样本离子浓度对检测结果的影响数据表明,离子浓度的增加,会提高检测的灵敏度,但是同时也会降低检测限。当使用灭菌后的去离子水稀释大肠杆菌时,该方法的检测限为7500 cfu/mL,灵敏度为1.028×10-6,检测时间少于2h。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 绪论
• 1.1 课题的背景与意义
• 1.2 免疫磁球的制备原理
• 1.2.1 物理吸附
• 1.2.2 共价结合
• 1.3 免疫磁球的工作原理
• 1.4 免疫磁球检测方法
• 1.4.1 双抗体夹心法测抗原
• 1.4.2 双抗原夹心法测抗体
• 1.4.3 间接法测抗体
• 1.4.4 竞争法测抗体
• 1.4.5 竞争法测抗原
• 1.4.6 捕获包被法测抗体
• 1.5 免疫磁球的应用
• 1.5.1 生物分离
• 1.5.2 固定化酶和细胞
• 1.5.3 免疫检测
• 1.6 研究目的及意义
• 1.7 研究内容
• 第2章 实验材料与方法
• 2.1 实验试剂与仪器
• 2.1.1 实验试剂
• 2.1.2 实验仪器
• 2.2 磁性微球的制备
• 2.2.1 聚苯乙烯/丙烯酸磁性微球的制备
• 2.2.2 聚苯乙烯/丙烯酰胺磁性微球的制备
• 2.3 免疫磁球的制备方法
• 2.4 免疫磁球的稳定性试验
• 2.5 免疫磁球检测大肠杆菌
• 第3章 免疫磁球的制备
• 3.1 磁性微球的性能
• 3.1.1 聚苯乙烯/丙烯酸磁性微球性能表征
• 3.1.2 聚苯乙烯/丙烯酰胺磁性微球性能表征
• 3.2 磁球类型对包被量的影响
• 3.3 抗磁比对包被量的影响
• 3.4 包被时间对包被量的影响
• 3.5 包被缓冲液类型对包被量的影响
• 3.6 抗体包被量的测定
• 3.7 本章小结
• 第4章 免疫磁球的稳定性
• 4.1 稳定性的评价方法
• 4.2 戊二醛活化对包被量的影响
• 4.3 戊二醛浓度对稳定性的影响
• 4.4 超声波前处理对稳定性的影响
• 4.5 包被液类型对稳定性的影响
• 4.6 本章小结
• 第5章 免疫磁球检测大肠杆菌
• 5.1 检测结果的评价方法
• 5.2 菌液浓度的标定
• 5.3 酶标抗体工作浓度的确定
• 5.4 封闭液类型对信噪比的影响
• 5.5 BSA 浓度对信噪比的影响
• 5.6 封闭时间对信噪比的影响
• 5.7 离子浓度对检测结果的影响
• 5.8 本章小结
• 结论
• 参考文献
• 攻读学位期间发表的学术论文
• 致谢