虎斑颈槽蛇中国大陆亚种（Rhabdophis tigrinus lateralis）颈背腺及其毒液的研究

论文摘要

虎斑颈槽蛇（Rhabdophis tigrinus）隶属游蛇亚科颈槽蛇亚属,为无管、无沟后毒牙蛇类。研究发现,该蛇具有两个产毒腺体,即位于口腔上颌部位的Duvernoy腺体和位于颈背部的颈背腺体。自Duvernoy腺体被认定为该蛇的产毒器官后,人们对其结构、细胞构成、分泌物性质、组成以及免疫学特性等方面都进行了大量研究;对于该蛇的另一种特殊腺体—颈背腺体,相关的研究报道较少。而对于虎斑颈槽蛇中国大陆亚种（Rhabdophis tigrinus lateralis）颈背腺体分泌物组份的生物化学研究,尚未有报道。因此,本研究以我国福建省龙岩产的虎斑颈槽蛇中国大陆亚种为研究对象,对其颈背腺体结构进行了观察;并对其毒液的性质进行了分析研究。其主要研究工作包括以下几个方面:1.解剖虎斑颈槽蛇中国大陆亚种（Rhabdophis tigrinus lateralis）颈背腺体,发现腺体呈珠球状平行排列,8～13对不等,各腺体独立存在,腺体上无开口。2.测定颈背腺毒液的多种理化性质和生物活性,结果表明:毒液具有神经毒性,对小白鼠的半致死量（LD50）为97.99 mg/kg;Lowry法测得毒液中蛋白质含量达87 %,SDS-PAGE电泳呈现多条蛋白质条带;具有水解明胶和酪蛋白的活性,且其活性可被EDTA抑制,提示虎斑颈槽蛇中国大陆亚种颈背腺毒液中可能含有金属蛋白酶;对颈背腺毒液其它性质,如磷脂酶A活性、5’核甘酸酶活性、碱性磷酸单酯酶活性、磷酸二酯酶活性,当试验样品浓度为1 mg/ml时,也未检测到以上活性;在试验毒液浓度为10 mg/ml时,未检测到凝血,溶血活性。抑菌试验发现,毒液并无广谱的抑菌活性,仅对嗜热链球菌和地衣芽孢杆菌产生了微弱的影响（最小抑菌浓度为12.5 mg/ml,抑菌圈分别为6mm和8mm）,可见,颈背腺毒液中含有的抑菌成份活性并不高。3.采用离子交换层析和凝胶过滤层析的方法,从颈背腺毒液中分离纯化出分子量为81 KDa的金属蛋白酶。电泳结果显示为单一条带,该蛋白质由一个亚基组成。以酪蛋白为底物测得其蛋白质水解酶比活力为0.56 U/mg。酶的最适作用温度为40℃,最适pH为8;抑制剂EDTA,EGTA,β-巯基乙醇对酶活力有明显的抑制作用,而PMSF（丝氨酸蛋白酶抑制剂）对酶活力的影响相对较小;K+对酶活力有明显的抑制作用,Ca2+和Zn2+对其活性有一定增强作用;未检测到磷脂酶A活性,5’核甘酸酶活性,碱性磷酸单酯酶和磷酸二酯酶活性存在;无水解纤维蛋白原活性和凝血活性;动物试验表明该组份无出血活性。总之,本论文对虎斑颈槽蛇中国大陆亚种颈背腺体以及毒液性质进行了分析研究,并从中分离纯化出一种金属蛋白酶,为我们进一步认识虎斑颈槽蛇颈背腺体的结构、功能以及该蛇致死致伤的分子机制提供了理论依据和实验基础,也为新药物的研究开发提供了可能的资源途径。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 1. 文献综述
• 1.1 蛇毒的研究与应用概况
• 1.2 虎斑颈槽蛇概况
• 1.3 虎斑颈槽蛇毒腺的研究现状
• 2. 引言
• 2.1 研究目的和意义
• 2.2 本研究的主要内容
• 2.3 本研究的技术路线
• 3. 虎斑颈槽蛇中国大陆亚种（Rhabdophis tigrinus lateralis）颈背腺体及其毒液性质的研究
• 3.1 材料与方法
• 3.2 结果
• 3.3 讨论
• 4 虎斑颈槽蛇中国大陆亚种颈背腺毒液中金属蛋白酶的分离及其性质测定
• 4.1 料与方法
• 4.2 结果
• 4.3 讨论
• 5 全文小结
• 参考文献
• 作者在攻读硕士学位期间发表的论文目录、科研情况
• 致谢