利用定点突变技术研究nm23-H1基因逆转肺癌侵袭转移表型的分子机制

论文摘要

背景与目的 肺癌的侵袭和转移是肺癌的恶性表型，也是肺癌致死的主要原因。已有的研究表明，肺癌侵袭转移是一个多阶段、多步骤发生的复杂过程，并受肺癌转移抑制基因和肺癌转移促进基因的双重调控。因此，研究和阐明调控肺癌侵袭和转移的分子机制，具有十分重要的意义。nm23-H1基因是第一个被发现的重要的肿瘤转移抑制基因，它的结构和功能的异常与癌细胞的侵袭和转移能力密切相关。我们前期的研究工作已经证明，nm23—H1基因的低表达和杂合性缺失与人肺癌的高转移性有密切关系。将野生型nm23—H1基因转染人高转移大细胞肺癌细胞株L9981可以逆转L9981细胞株的侵袭转移表型。但是，有关nm23-H1基因逆转肺癌侵袭和转移表型的分子机制，以及nm23-H1基因点突变对其抑制肺癌侵袭转移有何影响的研究，国内外均无报道。基因定点突变是在已知基因的预定位点通过替换、插入或缺失一定长度的核苷酸片段，精确地改变基因的特定碱基序列，从而研究基因表达调控机制及蛋白质结构与功能的关系。通过定点

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 实验流程图
• 第一部分 利用定点突变技术构建突变nm23-H1和EGFP融合基因
• 1.材料与方法
• 2.结果
• 3.讨论
• 4.小结
• 第二部分 野生型和突变型nm23-H1基因真核表达载体的构建及其转基因人高转移大细胞肺癌细胞株L9981的建立
• 1.野生型和突变型nm23-H1和EGFP融合基因真核表达载体的构建
• 2.稳定表达野生型和突变型nm23-H1基因的人高转移大细胞肺癌细胞株L9981的建立
• 3.转基因人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中野生型和突变型nm23-H1基因的鉴定
• 4.讨论
• 5.小结
• 第三部分 野生型和突变型nm23H1-EGFP融合基因转染前后人高转移大细胞肺癌细胞株L9981细胞生物学行为的变化
• 1.材料与方法
• 2.结果
• 3.讨论
• 4.小结
• 第四部分 野生型和突变型nm23-H1蛋白的原核表达及其生物学活性检测
• 1.高效原核表达载体PBV220的改造
• 2.野生型和突变型nm23-H1基因原核表达载体的构建
• 3.野生型和突变型nm23-H1蛋白的表达、纯化和鉴定
• 4.野生型和突变型nm23-H1蛋白生物学活性的检测
• 5.讨论
• 6.小结
• 全文总结
• 创新性自我评述
• 参考文献
• 文献综述
• 个人简历
• 致谢