棉花黄萎病生防真菌的筛选策略研究及防效验证

论文摘要

由大丽轮枝菌引起的棉花黄萎病是棉花上最重要的病害之一并且很难防治。我们从棉花地不同生境中（健田健株、病田健株、病田病株以及它们的根围土和普通土）分离到的373株真菌中筛选得到105株颉颃菌。为了建立一个快速有效的生防菌筛选体系,根据平板颉颃实验、蛋白酶、纤维素酶、几丁质酶活性检测实验,以及解磷、固氮活性检测等室内测定结果对各颉颃菌赋值。从中,我们选择了33株颉颃菌进行第一次温室防病和促生实验,来验证该评估体系。所选菌株的防效为-64.20-69.78%,生物量的增加值为-29.16-88.62%。根据第一次温室实验结果筛选得到13株有生防潜力的真菌进一步开展了两次重复的温室实验并测定了这些菌株的ITS序列。从建立的筛选体系中,我们发现从病田植株中比其它生境中能够筛选得到更多的颉颃菌;排除防效为负值的真菌,颉颃真菌的赋值和它们温室实验中防病效果基本呈正比。这说明该体系的建立为生防菌提供了有效的筛选策略。同时,通过该筛选体系,我们也得到了一些有潜力的生防菌。由生防菌By125（Fusarium oxysporum）和Bx247（Nectriahaematococca）处理过的植株,其病情指数和对照（只接种病原菌）在95%水平上表现出显著差异性,它们的防效分别为69.03%和69.78%,生物量增加百分比分别达到34.67%和62.63%。利用Bx247、By125和By231（Phomopsi sp.,温室防效63.43%）3株菌株开展了大田露地初步实验,初花期防效分别为33.25%,30.12%和29.64%,生物量增加百分比分别为13.60%,13.00%和10.75%（由于季节原因未能有收获）。田间施用方法有待改进。本研究第一次用Phomopsis sp.（By231）防治棉花黄萎病,促进棉花生长。本文还研究了从8种不同青枯病菌寄主上分离纯化得到的181株青枯菌株,根据Hayward划分青枯病菌生化变种的标准,进行归类划型。研究结果表明:中国青枯病菌生化变种以3和4为主,分别占54.7%和33.7%;而生化变种2、5和3-1分别只占3.9%、1.7%和6.1%;未发现1型生化变种。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一部分 文献综述
• 第一章 棉花黄萎病及其生物防治研究进展
• 1. 棉花黄萎病病原菌概述
• 2. 棉花黄萎病发病症状及发生规律
• 3. 棉花黄萎病危害与致病机理
• 3.1 棉花黄萎病危害
• 3.2 棉花黄萎病致病机理
• 4. 棉花黄萎病的发病原因
• 4.1 土壤带菌
• 4.2 土壤肥力及地势与发病的关系
• 4.3 温度与发病的关系
• 4.4 杀虫剂的使用与发病关系
• 5. 棉花黄萎病的传统防治方法及存在问题
• 5.1 选育抗病品种
• 5.2 化学防治
• 5.3 综合防治
• 5.4 存在的问题
• 6. 棉花黄萎病生物防治研究进展及其优势
• 6.1 生防细菌
• 6.2 生防真菌
• 6.3 其它生防因子
• 7. 本研究的目的及意义
• 第二章 青枯病菌分类体系研究进展
• 1. 青枯菌的寄主
• 2. 青枯菌的危害
• 3. 青枯菌的生化变种研究
• 4. 青枯菌新的分类体系
• 5. 本研究的目的和意义
• 第二部分 研究内容
• 第一章 棉花黄萎病颉颃真菌的筛选策略研究
• 1 材料与方法
• 1.1 真菌及其培养
• 1.2 植株和土壤样品的采集
• 1.3 样品的分离及保存
• 1.3.1 植株样品的分离与保存
• 1.3.2 土壤样品的分离及保存
• 1.4 分离真菌对大丽轮枝菌及其它6种病原真菌的平板颉颃试验
• 1.5 颉颃真菌产酶活性和解磷固氮能力检测
• 1.5.1 蛋白酶活性检测
• 1.5.2 几丁质酶活性检测
• 1.5.3 纤维素酶活性检测
• 1.5.4 颉颃真菌解磷、固氮能力检测
• 1.6 生防、促生潜力评估赋值
• 1.7 数据分析
• 2 结果与分析
• 2.1 分离真菌的统计结果
• 2.2 不同生境中颉颃真菌的筛选和比较
• 2.3 颉颃菌广谱性分析
• 2.4 不同来源中筛选得到的具有产酶活性的颉颃菌百分比
• 2.5 不同来源中筛选得到的具有解磷固氮能力的颉颃菌百分比
• 2.6 颉颃真菌生防、促生潜能评估
• 3 讨论
• 第二章 温室实验验证及有效生防真菌的鉴定
• 1 材料与方法
• 1.1 温室防效试验
• 1.2 促进棉苗生长效果试验
• 1.3 颉颃真菌的鉴定
• 1.4 数据分析
• 2 结果与分析
• 2.1 温室试验结果
• 2.2 13株生防真菌的鉴定结果
• 2.3 赋值和温室防效及促生试验结果的关系
• 3 讨论
• 第三章 颉颃菌用于防治棉花黄萎病的田间预备实验
• 1 材料与方法
• 1.1 供试棉花品种
• 1.2 菌剂制备
• 1.3 田间实验
• 1.4 病情统计标准
• 1.5 数据分析
• 2 结果与分析
• 3 讨论
• 第四章 中国青枯病菌生化变种研究
• 1 材料与方法
• 1.1 菌株来源
• 1.2 所用的糖和醇
• 1.3 生化变种分类依据
• 1.4 实验方法
• 2 结果与分析
• 3 讨论
• 全文结论
• 参考文献
• 文章及专利
• 致谢