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AS、GS和PNS诱导MSCs分化为心肌样细胞的研究

2020-11-23阅读(160)

AS、GS和PNS诱导MSCs分化为心肌样细胞的研究

论文摘要

心肌梗死后存活的心肌减少、继发心室重构,是造成心肌梗死患者发生心力衰竭、心律失常甚至死亡的重要原因,由于心肌细胞不能再生,损害的心肌细胞不能修复和分化,因此临床中药或西药治疗、介入治疗和手术治疗均不能代替坏死的心肌,而心脏移植由于手术复杂、供体困难和费用高等原因,在临床很难推广。因此,寻找可代替死亡细胞的移植物来防治心肌梗死后心衰、心肌重构,改善心功能是近年来研究的重要课题。近年的研究发现,骨髓基质中还存在另一类干细胞称之为骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）,在一定的环境和刺激因子作用下可分化为多种组织细胞,在组织工程中,MSCs作为一种重要的种子细胞越来越引起人们的关注,将MSCs诱导分化为心肌细胞移植治疗心肌梗死,为中药与干细胞结合治疗心血管疾病提供新的理论依据。 1、理论研究 MSCs属于非造血细胞,其基本特点是贴壁生长,呈纺锤状的纤维细胞样形态,国内外研究认为MSCs具有独特的表征和巨大的培养增殖能力,并且认为MSCs是多向分化潜能的干细胞,在一定条件下可以分化为骨骼、软骨、肌肉、神经和造血微环境组织等,具有很高的可塑性。国内外学者在体外培养中将MSCs经细胞传代后用5-氮胞苷（5-azacytidine,5-aza）对其进行诱导分化,可见有心肌细胞样超微结构,有心肌特异性基因表达,并有持续的动作电位,表明他们成功地诱导出心肌细胞。另有学者将MSCs直接注入自体心肌组织内,发现有心肌样细胞形成,具有肌钙蛋白T和肌球蛋白重链染色阳性的心肌细胞特异性标志,表明MSCs在体内微环境条件下可以诱导分化为心肌细胞 近年来,有研究证明中药能有效地诱导MSCs分化为神经元细胞和成骨细胞,并且诱导率高。 由于MSCs的可塑性大,在某种条件下可以分化为包括心肌细胞在内的多种功能细胞,而应用中药成功诱导MSCs分化为神经元样细胞和成骨细胞的研究结果提示我们,在理论上可以相信某些中药有可能诱导MSCs分化为心肌细胞。 目前国内外对中药能否诱导MSCs分化为心肌细胞的研究还报道甚少,所以我们在众多的中药中,筛选临床上常用治疗冠心病的药物,如黄芪、人参、三七

论文目录

  • 引言
  • 第一部分 理论研究
  • 第一节 骨髓干细胞概述
  • 1、干细胞特性与来源
  • 2、干细胞的应用
  • 第二节 骨髓间充质干细胞的研究进展
  • 1、MSCs表形特征
  • 2、MSCs的可塑性
  • 3、MSCs的生物学性状
  • 4、MSCs分离、培养、扩增
  • 5、MSCs鉴定
  • 第三节 骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞的研究
  • 1、分化心肌细胞
  • 1.1、体内实验
  • 1.2、体外实验
  • 2、临床应用研究及分析
  • 3、MSCs的前景
  • 第四节 中药对诱导骨髓间充质干细胞的研究
  • 1、某些中药在MSCs诱导分化神经细胞上的突破
  • 2、某些中药在MSCs诱导分化成骨细胞上的突破
  • 第五节 黄芪、人参和三七对缺血性心脏病的研究
  • 1、黄芪
  • 1.1、黄芪的临床应用
  • 1.2、黄芪甲苷药理研究
  • 2、人参
  • 2.1、人参的临床应用
  • 2.2、人参总皂甙药理研究
  • 3、三七
  • 3.1、三七的临床研究
  • 3.2、三七总皂甙药理研究
  • 第六节 存在的问题和中药干预的研究展望
  • 第二部分 实验研究
  • 1、实验目的
  • 2、技术路线
  • 第一节 MSCs培养与诱导
  • 1、MSCs分离、培养、扩增、鉴定
  • 1.1、材料
  • 1.2、方法
  • 2、MSCs的诱导分化
  • 2.1、材料
  • 2.2、方法
  • 3、心肌样细胞免疫组化鉴定
  • 3.1、材料
  • 3.2、方法
  • 4、心肌样细胞逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）鉴定
  • 4.2、正常心肌细胞分离培养
  • 4.2、骨髓MSCs诱导为心肌样细胞总RNA的提取
  • 4.2.1、材料
  • 4.2.2、方法
  • 4.3、MSCs诱导分化为心肌样细胞α-MHC、β-MHC表达测定操作
  • 4.3.1、材料
  • 4.3.2、方法
  • 第二节 结果
  • 1、MSCs形态特性
  • 2、MSCs表面抗原的鉴定
  • 3、AS、GS和PNS对MSCs增殖的影响
  • 4、MSCs体外诱导后的形态变化
  • 5、正常心肌细胞的形态
  • 6、正常心肌细胞的活性
  • 7、诱导MSCs的免疫组化鉴定
  • 8、RT-PCR检测诱导后的MSCs心肌特异因子的表达
  • 9、心肌样细胞分化率
  • 第三节 讨论
  • 1、大鼠骨髓MSCs培养材料来源的选择探讨
  • 2、大鼠骨髓MSCs分离培养方法的选择探讨
  • 3、大鼠骨髓MSCs培养条件的选择探讨
  • 4、大鼠骨髓MSCs的表型特点探讨
  • 5、大鼠骨髓MSCs的诱导探讨
  • 6、心肌细胞分离过程中应注意的问题
  • 7、关于心肌结蛋白（Desmin）与心肌肌钙蛋白I（cTnI）的探讨
  • 8、关于心肌肌球蛋白重链（MHC）的探讨
  • 9、关于“心肌样细胞”的探讨
  • 10、横向分化为心肌细胞的可能机制和诱导因素
  • 11、关于AS、GS、PNS诱导MSCs分化为心肌样细胞的初步的探讨
  • 12、关于心肌细胞诱导率
  • 13、益气活血中药与MSCs关系探讨
  • 结语
  • 参考文献
  • 附录
  • 致谢

    • 相关论文文献

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