论文摘要
目的：分析哮喘患儿外周血CD4+T淋巴细胞表达nAChRα7与相应的细胞培养液IL-4、IFN-γ水平的相关关系，探讨nAChRα7表达与Th1／Th2平衡的关系，进一步求证nAChRα7在哮喘发病过程中的临床意义。材料与方法：根据哮喘防治常规中的诊断标准，选择典型的发作期支气管哮喘患儿30例（男16例、女14例），健康对照20例（男11例、女9例）。取清晨空腹静脉血8ml，EDTA抗凝，分离淋巴细胞，把等量细胞（2×106）分别装入3个等容（3ml）的含1640培养皿中，并分别加入烟碱（100uM）、α-BTX（1ug／ml）、空白对照，于5％CO2、37℃培养箱恒温孵育，培养24小时后提取淋巴细胞，并收取培养液-20℃冻存，待测。用三色流式细胞仪检测淋巴细胞表达CD3、CD4、nAChRα7。用ELISA法检测淋巴细胞培养液中IFN-γ、IL-4的水平。结果：1．流式细胞检测：①健康儿童外周血CD4+T淋巴细胞可表达nAChRα7，哮喘患儿外周血CD4+T淋巴细胞表达nAChRα7明显增高。（3.91±2.67％／2.90±1.01％，t=2.17，P＜0.05）。②烟碱刺激后外周血CD4+T淋巴细胞表达nAChRα7较未刺激增加（健康对照组4.86±2.82％2.90±1.01％，t=3.03，P＜0.01，哮喘组6.73±2.49％／3.91±2.67％，t=4.17，P＜0.01）；且烟碱刺激后哮喘组较正常组表达增加（6.73±2.49％／4.86±2.82％t=2.35，P＜0.05）。③α-BTX刺激后外周血CD4+T淋巴细胞表达nAChRα7降低（健康对照组2.40±3.18％／2.90±1.01％，t=0.86，P＞0.05，哮喘组3.23±3.65％／3.91±2.67％，t=1.01，P＞0.05），无统计学意义。2．ELISA检测：①哮喘患儿培养液中IL-4水平较正常对照儿童增加（6.35±1.62／4.69±0.79 pg／ml，t=4.74，p＜0.01），IFN-γ水平较正常对照儿童减低（2.04±0.94／2.84±1.17 pg／ml，t=2.50，p＜0.05）；②烟碱刺激后IL-4水平较未刺激增高（健康对照组5.87±1.12／4.69±0.79pg／ml，t=3.76，P＜0.01、哮喘组7.64±1.51／6.35±1.62pg／ml，t=3.14，P＜0.01），IFN-γ较未刺激减低（健康组1.91±0.72／2.84±1.17pg／ml，t=3.44，P＜0.01、哮喘组1.44±0.64／2.04±0.94pg／ml，t=2.86，P＜0.05）；且哮喘组IL-4增加、IFN-γ降低更加明显。③α-BTX刺激后IL-4（健康对照组4.26±1.69／4.69±0.79pg／ml，t=1.05，P＞0.05、哮喘组5.80±1.20／6.35±1.62pg／ml，t=1.27，P＞0.05），IFN-γ，（健康对照组3.37±0.94／2.84±1.17pg／ml，t=1.36，P＞0.05、哮喘组2.18±1.38／2.04±0.94pg／ml，t=0.45，P＞0.05）。3．外周血CD4+T淋巴细胞表达nAChRα7与培养液表达IL-4呈正相关关系（r=0.517，p＜0.01）、与IFN-γ呈负相关关系（r=-0.288，p＜0.05）。结论：1．哮喘患儿存在免疫失衡，外周血CD4+T淋巴细胞分泌IL-4增加，IFN-γ减低：2．哮喘患儿外周血CD4+T淋巴细胞表面的nAChRα7表达增加，而且外周血CD4+T淋巴细胞表达nAChRα7与淋巴细胞培养液IL-4水平呈正相关关系，与IFN-γ水平呈负相关关系。
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