论文摘要
目的建立免疫磁珠法分离并培养人脑胶质瘤干细胞的方法。方法将术中取得的脑胶质瘤标本,在严格无菌的条件下,去除血管及坏死的肿瘤组织,通过反复剪切、消化和吹打成单细胞悬液,200目筛网过滤,免疫磁珠分选试剂盒分选出CD133+细胞,用神经干细胞无血清培养法培养出具有单细胞克隆能力的细胞球,取第3代进行诱导分化,分化前、后分别用免疫细胞荧光化学方法鉴定肿瘤干细胞及分化后细胞。结果免疫磁珠分选出的CD133+细胞,可悬浮生长并形成神经干细胞样细胞球,有较强的增殖能力,胶质瘤干细胞标志物nestin、CD133阳性,并具有肿瘤的核型,分化后细胞表达神经元β-tubulin 3和星形胶质细胞GFAP特异性抗原,而nestin、CD133阴性。结论免疫磁珠分选法可避免原代培养中众多细胞混杂生长的发生,能够从大量肿瘤细胞中分离出只占极少比例的肿瘤干细胞,细胞结合磁珠后其生物学特性未受到明显的影响,在体外可以长期培养和传代,进一步证实了肿瘤干细胞的存在,且免疫磁珠法分离肿瘤干细胞效果肯定,是一种简便而有效的方法,从而为胶质瘤干细胞的进一步研究奠定基础。