石斛再生体系的建立及多倍体诱导的初步研究

论文摘要

本研究论文主要是通过对报春石斛Dendrobium primulinum、Dendrobium utopia‘Messenger’×Dendrobium whiterabbit‘Sakurahime’和Dendrobium snowflake‘Red star’×Dendrobium whiterabbit‘Sakurahime’进行系统的组织培养试验,建立起良好的石斛再生体系,并结合秋水仙素溶液处理Den.utopia‘Messenger’×Den.whiterabbit‘Sakurahime’和Den.snowflake‘Red star’×Den.whiterabbit‘Sakurahime’进行多倍体诱导试验,为今后的石斛兰组织培养与多倍体研究提供重要的参考依据,试验结果表明:成熟的石斛兰种子在培养基上萌发不需要添加生长调节物质,而且对培养基类型要求不高。光培养和暗培养对种胚的萌发影响不大,但与原球茎的生长有关,在种胚萌发形成原球茎后应及时补充光照,否则引起败育。在对石斛的茎段进行灭菌处理时,为提高成活率,降低死亡率和污染率,应依据茎段的幼嫩程度,分批消毒。对于较幼嫩的茎段,用70%乙醇浸泡30 s,0.1%升汞灭菌6 min,随着茎段成熟度的提高,升汞灭菌时间应稍微延长。不同激素种类与浓度配比对外植体的诱导分化结果不同,激素组合6-BA5.0 mg·L-1+2,4-D1.5 mg·L-1,有利于愈伤组织的诱导;激素组合6-BA3.0 mg·L-1+NAA0.1 mg·L-1,有利于芽的分化。培养基MS+6-BA1.0 mg·L-1+NAA0.1 mg·L-1+椰子水10%对报春石斛的愈伤组织和不定芽增殖效果好,外源添加物椰子水和香蕉汁对石斛兰的继代增殖均有促进作用。生根壮苗的适宜培养基为MS+6-BA0.5 mg·L-1+NAA1.0 mg·L-1+活性炭0.5 g·L-1,添加活性炭可提高石斛的生根率,改善根的质量。多倍体诱导过程中,诱变效果因秋水仙素溶液处理的方法不同而存在差异,本试验中的2种石斛均选择浸泡法处理较为理想,适宜的秋水仙素浓度为0.2 mg·L-10.8 mg·L-1,其中在0.4 mg·L-10.6 mg·L-1浓度范围内两种石斛的变异率较高。对石斛变异植株与正常植株进行外部形态观察及细胞学鉴定,发现变异株与正常株形态差异明显,气孔、保卫细胞数目及大小之间差异也显著。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 目录
• 第一章 绪论
• 1.1 引言
• 1.1.1 研究背景
• 1.1.2 研究目的和意义
• 1.2 国内外研究现状
• 1.2.1 种质资源调查与鉴定
• 1.2.2 常规育种
• 1.2.3 生物技术育种
• 1.2.4 石斛组织培养技术的研究进展
• 1.2.5 多倍体育种在观赏植物中的应用
• 1.2.6 存在的问题与展望
• 1.3 研究目标和主要研究内容
• 1.3.1 研究目标
• 1.3.2 主要研究内容
• 1.4 研究技术路线
• 第二章 研究材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.2 试验方法
• 第三章 结果与分析
• 3.1 胚培养试验结果
• 3.2 茎段培养试验结果
• 3.3 继代增殖试验结果
• 3.3.1 基本培养基MS 和1/2MS 对石斛不定芽继代增殖的影响
• 3.3.2 不同浓度的6-BA 与NAA 相配合对石斛继代增殖的影响
• 3.3.3 外源添加物对石斛不定芽增殖的影响
• 3.4 石斛生根壮苗试验结果
• 3.4.1 基本培养基MS 和1/2MS 对生根的影响
• 3.4.2 不同激素配组的生根壮苗试验结果
• 3.4.3 活性炭（AC）对石斛生根的影响
• 3.5 多倍体诱导试验结果
• 3.5.1 不同处理方式的诱变效果
• 3.5.1.1 秋水仙素浸泡法对石斛的诱导效果
• 3.5.1.2 培养基诱导法对石斛的诱导效果
• 3.5.2 多倍体的初步鉴定
• 第四章 结论与讨论
• 4.1 结论
• 4.1.1 石斛再生体系的建立
• 4.1.2 秋水仙素诱导变异植株
• 4.2 讨论
• 4.2.1 外植体的选择
• 4.2.2 对石斛继代增殖有影响的因素
• 4.2.3 关于秋水仙素溶液处理的方法及其材料的选择问题
• 4.2.4 多倍体诱导研究中出现的问题
• 4.2.5 石斛多倍体的应用前景
• 参考文献
• 附录
• 在读期间的学术研究
• 致谢