论文摘要
目的:探讨体外循环（cardiopulmonary bypass, CPB）下再灌注初短暂低pH液复灌对兔心肌缺血再灌注（ischemia/reperfusion, I/R）损伤的保护作用并确定灌注液的最佳pH值。方法:选择健康成年新西兰大白兔36只,雌雄不拘,体重2.5-3.0 kg,随机分为6组（n=6）:对照组（C）不阻断主动脉,单纯转机3 h;缺血再灌注组（I/R）心脏停搏缺血40 min,再灌注2 h;其余各组心脏缺血40min,再灌注2 h,再灌注的前2 min分别给予pH值为7.4、7.1、6.9、6.7的Krebs-Henseleit液（K-H液）持续灌注至主动脉开放。实验结束后,比色法测定心肌组织中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）活性及酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）测定肌钙蛋白I（cardiac troponin I,cTnI）浓度;光镜观察心肌组织形态学改变;透射电镜下观察心肌组织超微结构。结果:与对照组比较,各组心肌组织LDH活性、cTnI浓度均增加（P<0.05）,与I/R组比较,pH7.4组LDH活性及cTnI浓度差异无统计学意义,低pH液复灌各组LDH活性、cTnI浓度均降低（P<0.05）,其中pH6.9组最低;病理学检查示I/R组及pH7.4组损伤最为严重,低pH液复灌各组中pH6.9组损伤最轻。结论:体外循环下再灌注初短暂低pH液复灌产生心肌保护作用,且pH 6.9的K-H液灌注产生的效果最好。第二部分低pH液复灌对兔缺血再灌注心肌内质网应激与细胞凋亡的影响目的:探讨CPB下再灌注初短暂低pH液复灌对兔I/R心肌内质网应激（endoplasmic reticulum stress, ERS）与细胞凋亡的影响。方法:健康成年新西兰大白兔30只,雌雄不拘,体重2.53.0 kg,随机分为5组（n=6）:对照组（C）不阻断主动脉,单纯转机3 h;缺血再灌注组（I/R）心脏停搏缺血40 min,再灌注2 h;pH7.4组与pH6.9组心肌缺血40 min,再灌注2 h,再灌注前2 min分别给予pH7.4、6.9的K-H液持续灌注至主动脉开放;缺血后处理组（I-postC）心肌缺血40 min后,于2 h的再灌注的前2 min给予10 s再灌/10 s缺血共6次的缺血后处理。实验结束后,比色法测定心肌组织中LDH活性;ELISA测定cTnI浓度;末端脱氧核苷酰基转移酶介导性dUTP切口末端标记（terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling, TUNEL）检测心肌细胞凋亡情况;逆转录多聚酶链反应（reversetranscription polymerase chain reation, RT-PCR）检测ERS分子葡萄糖调节蛋白78（glucose-regulated protein 78,GRP78）、钙网蛋白（calreticulin,CRT）mRNA的表达;免疫组化及蛋白质印迹（Western blot）检测凋亡分子caspase-12、C/EBP同源蛋白（C/EBP homologous protein,CHOP）蛋白表达以及透射电镜观察心肌组织超微结构改变。结果:与C组比较,其余各组LDH活性、cTnI浓度、心肌细胞凋亡率、GRP78与CRT mRNA表达、以及caspase-12与CHOP蛋白表达均明显增加（P<0.05）;与I/R组比较,pH7.4组各指标差异无统计学意义,各检测指标在pH6.9组及I-postC组均降低（P<0.05）,而后两者比较差异无统计学意义（P>0.05）。心肌组织超微结构观察示C组结构基本正常,I/R组及pH7.4组损伤最为严重,有明显的肌浆网扩张,pH6.9组及I-postC组肌浆网扩张较I/R组有所减轻。结论:再灌注初短暂低pH液复灌可调控ERS反应程度,抑制I/R导致的过度ERS,减轻内质网凋亡信号介导的细胞凋亡的发生而产生心肌保护作用。