论文摘要
鸡传染性支气管炎（Avian Infectious Bronchitis,IB）是由鸡传染性支气管炎病毒（Avian Infectious Bronchitis Virus, IBV）引起的一种急性、高度接触性传染病。由于IBV核衣壳（N）蛋白是其主要的结构蛋白,具有很强的免疫原性,是IBV诱导体液免疫、细胞免疫应答的重要免疫原,而且比较保守,因此适宜用作检测IBV特异性抗体的抗原。本研究参照GenBank中IBV N基因序列设计一对特异性引物,提取IBV的RNA进行RT-PCR扩增,并克隆至pGEM-T Easy载体中,转化E.coli DH5α感受态细胞,获得重组质粒pGEM-T-N,进行序列测定。将目的片段经EcoR I和Xho I双酶切,克隆入经同样处理的大肠杆菌原核表达质粒pET-28a（+）,转化BL21（DE3）感受态细胞并用IPTG进行诱导表达,通过镍离子亲和树脂对其进行纯化。SDS-PAGE结果表明,IBV N基因在BL21（DE3）成功表达,相对分子质量约为50 kDa,表达的目的蛋白主要以可溶形式表达。经Western blotting分析,表明IBV N蛋白能被IBV阳性血清特异识别,具有良好的反应原性。
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