论文摘要
背景非对称二甲基精氨酸（Asymmetric Dimethylarginine，ADMA）是一种内源性一氧化氮合酶（Nitric Oxide Synthase，NOS）抑制物。它能竞争性抑制NOS，减少一氧化氮（Nitric Oxide，NO）生成。研究表明，ADMA促进动脉粥样硬化的形成，是一个新的心血管疾病危险因子。基质金属蛋白酶（Matrix Metalloproteinases，MMPs）是一类Zn2+依赖性蛋白水解酶，能降解胶原和细胞外基质，损害内皮功能，对动脉粥样硬化的发生发展有重要影响。强力霉素是一类四环素类药物，对MMPs具有广谱的抑制作用。本实验拟通过观察强力霉素对ox-LDL诱导的内皮细胞MMP-2表达及ADMA水平的影响，初步探讨其对ox-LDL诱导内皮细胞损伤的保护作用；并观察ADMA对内皮细胞MMP-2蛋白表达及活性氧（Reactive Oxygen Species，ROS）水平的影响，初步探讨ADMA对MMP-2蛋白表达的影响及机制。方法实验分为三部分：（1）通过MTT法测定细胞生存率，观察ox-LDL对内皮细胞损伤的量效关系（0，25，50，75，100，200μg／ml，24 h）和时效关系（50μg／ml，12，24，48 h）；（2）观察强力霉素对ox-LDL诱导的内皮细胞MMP-2蛋白表达及ADMA水平的影响：用ox-LDL（50μg／ml）和不同浓度强力霉素（0，5，10，20，40μg／ml）共同孵育内皮细胞24 h，分别测定细胞生存率、ADMA水平（高效液相色谱法）以及MMP-2表达（western blot）；（3）观察ADMA对内皮细胞MMP-2蛋白表达及ROS水平的影响：用不同浓度ADMA（0，1，3，10，30μmol／L）孵育内皮细胞24 h，分别测定细胞生存率、MMP-2蛋白表达以及ROS水平（荧光探针发光法），并观察细胞内抗氧化剂PDTC（10μmol／L）和NOS底物L-精氨酸（0.5mmol／L）对此的拮抗作用。结果（1）ox-LDL呈浓度和时间依赖性降低内皮细胞生存率；（2）与空白对照组相比，ox-LDL（50μg／ml）显著升高内皮细胞ADMA与MMP-2蛋白表达水平（P＜0.01）。强力霉素（5～20μg／ml）能明显抑制ox-LDL诱导的细胞生存率的降低，并显著降低ox-LDL诱导的ADMA水平与MMP-2蛋白表达的升高（强力霉素5μg／ml时P＜0.05，强力霉素10，20μg／ml时P＜0.01）；（3）ADMA（3～30μmol／L）呈浓度依赖性降低内皮细胞生存率（P＜0.01），并升高内皮细胞ROS水平与MMP-2蛋白表达水平（ADMA 3μmol／L时P＜0.05，ADMA 10，30μmol／L时P＜0.01）。L-精氨酸（0.5 mmol／L）或PDTC（10μmol／L）均能取消30μmol／LADMA所诱导的内皮细胞ROS水平与MMP-2蛋白表达的升高（P＜0.01）。结论（1）ox-LDL损伤内皮细胞与诱导MMP-2蛋白表达有关；该过程可能涉及ADMA途径；（2）强力霉素通过抑制MMP-2表达保护内皮细胞，该作用可能与ADMA水平降低有关；（3）ADMA可能通过诱导氧化应激增加MMP-2蛋白表达。
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标签：非对称二甲基精氨酸论文; 基质金属蛋白酶论文; 强力霉素论文; 氧化应激论文;