唑来膦酸对多发性骨髓瘤成骨细胞增殖及其RANKL/OPG表达的作用研究

论文摘要

目的:（1）研究多发性骨髓瘤（MM）患者骨髓基质细胞（BMSCs）向成骨细胞（OB）分化及其RANKL和OPG表达;（2）研究唑来膦酸对MM OB增殖及其RANKL和OPG表达的影响。方法:取MM患者骨髓液3-5 ml密度梯度离心法分离单个核细胞层原代培养形成BMSCs,贴壁传代后采用含有维生素C（50 mg/L）,地塞米松（10-8 mol/L）,β-甘油磷酸钠（10 mmol/L）的低糖DMEM培养基将BMSCs诱导成OB,倒置相差显微镜观察形态变化并用HE染色、瑞氏染色、碱性磷酸酶染色及VonKossa染色证实OB的存在;采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测并比较MM患者与对照组OB的RANKL和OPG mRNA表达水平。采用不同浓度唑来膦酸处理培养的OB,分别作用24 h、48 h和72 h后,通过（1）细胞计数试剂盒（CCK-8）检测OB增殖;（2）RT-PCR检测OB RANKL和OPG mRNA表达;和（3）酶联免疫吸附实验（ELISA）检测相应细胞培养上清液中sRANKL和OPG浓度来考察唑来膦酸的作用。结果:（1）MM患者BMSCs在条件培养基中诱导分化,形成的细胞具备OB形态学特征,ALP染色阳性,能形成钙结节。（2）MM患者OB RANKL mRNA表达高于对照组,与GAPDH的灰度比分别是0.72±0.02和0.65±0.01（P<0.05）;OPG mRNA表达低于对照组,与GAPDH的灰度比分别是0.43±0.02和0.49±0.01（P<0.05）。（3）OB用唑来膦酸处理后,唑来膦酸使OB的CCK-8实验吸光值呈不同程度升高。（4）[0]唑来膦酸作用24 h和48 h后,OB RANKL mRNA表达变化不明显。作用72 h,低浓度（10-9 mol/L）唑来膦酸显示能降低RANKL mRNA表达,与对照（0 mol/L）比较,差别有统计学意义（P<0.05）。OB培养上清的sRANKL浓度也呈现类似的变化。（5）唑来膦酸作用24 h后,OB OPG mRNA表达变化不明显。作用48 h,呈不同程度增加,以10-8 mol/L浓度最明显,与对照（0 mol/L）比较,差别有统计学意义（P<0.05）。作用72 h,呈不同程度增加,以10-7 mol/L浓度最明显,与对照（0 mol/L）比较,差别有统计学意义（P<0.05）。OB培养上清的OPG浓度也呈现类似的变化。结论:可以从MM患者的骨髓BMSCs培养出OB;与对照组比较,MM患者OB RANKL mRNA表达增加,OPG mRNA表达减低;唑来膦酸有促进OB增殖的作用;唑来膦酸可能下调OB RANKL表达,并且上调OPG表达。

论文目录

• 英文缩写词汇表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 引言
• 第一部分 多发性骨髓瘤骨髓基质细胞向成骨细胞分化及RANKL 和○PG 表达
• 材料
• 方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 第二部分 唑来膦酸对多发性骨髓瘤成骨细胞增殖及RANKL 和OPG 表达的影响
• 材料
• 方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 全文总结
• 参考文献
• 综述
• 致谢