肠道菌群分子指标在脾虚治疗中药活性组分研究中的应用

论文摘要

复方是中药的主要临床应用形式。中药复方活性成分的研究不仅可以阐明复方药理作用的物质基础,还可解释中药复方配伍的科学内涵。脾虚证是中医临床上常见的一类证候,是慢性消化系统疾病的主要证型,与肠道菌群的变化有密切关系。本研究将ERIC-PCR方法用于脾虚治疗中药复方活性组分研究,建立了客观、准确的评价方法并对临床常用三种脾虚治疗中药复方进行筛选,初步确定了三种复方治疗脾虚的活性组分。采用番泻叶、大黄水煎剂塑造脾虚大鼠模型,从大鼠粪便样品中获肠道菌群总DNA,建立脾虚模型大鼠的肠道菌群的ERIC-PCR图谱,通过对比造模前后大鼠粪便肠道菌群的ERIC-PCR指纹图谱,确定脾虚大鼠肠道菌群基因指纹特征以及脾虚治疗的评价指标体系,包括特征条带（净面积与丰度）、多样性指数和相似性指数;运用此评价体系对临床常用复方四君子汤、理中汤、补中益气汤的三个活性组分:乙酸乙酯部位、正丁醇部位及水部位的治疗作用进行了考察。本研究首次采用肠道菌群分子指标对中药复方活性组分进行筛选。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 绪论
• 1.1 脾虚治疗中药复方
• 1.2 脾虚症与肠道菌群变化
• 1.3 肠道菌群的研究方法
• 1.3.1 培养法
• 1.3.2 镜检法
• 1.3.3 16SrDNA 基因的聚合酶链式反应（polymerase chain reaction, PCR）方法
• 1.3.4 变性梯度凝胶电泳（denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE）与温度梯度凝胶电泳（temperature gradient gel electrophoresis,TGGE）
• 1.3.5 脉冲场凝胶电泳（pulsed-field gel electrophoresis, PFGE）
• 1.3.6 细菌的核酸探针鉴定技术
• 1.3.7 荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization，FISH）和荧光显微技术
• 1.3.8 肠道细菌基因间重复序列（Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus , ERIC）研究及应用进展
• 1.4 课题意义与研究内容
• 1.4.1 课题研究的意义和目的
• 1.4.2 课题的研究内容
• 第二章 脾虚证肠道菌群分子指标的建立
• 2.1 材料及仪器
• 2.1.1 实验材料
• 2.1.2 主要试剂
• 2.1.3 主要实验仪器
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 试剂配制
• 2.2.2 脾虚证动物模型的塑造与反证治疗
• 2.2.3 大鼠粪便样品的收集
• 2.2.4 大鼠粪便样品中肠道菌群总DNA 的提取
• 2.2.5 总DNA 质量检测
• 2.2.6 ERIC-PCR 反应条件及产物检测
• 2.2.7 ERIC-PCR 图谱分析
• 2.2.8 数据分析
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 脾虚动物模型的塑造
• 2.3.2 菌体基因组总DNA 质量评价
• 2.3.3 健康大鼠粪便肠道菌群的ERIC-PCR 图谱特征
• 2.3.4 番泻叶脾虚大鼠肠道菌群ERIC-PCR 特征条带和脾虚分子评价体系的建立
• 2.3.5 脾虚治疗中药复方对番泻叶脾虚模型大鼠治疗作用的评价
• 2.3.6 小结及讨论
• 第三章 脾虚治疗中药复方有效部位的筛选
• 3.1 实验材料与仪器
• 3.1.1 实验材料
• 3.1.2 主要试剂
• 3.1.3 主要实验仪器
• 3.2 实验内容与方法
• 3.2.1 供试样品及试剂配制
• 3.2.2 复方中不同极性部位的分离
• 3.2.3 脾虚证动物模型的塑造与治疗
• 3.2.4 大鼠粪便样品的收集
• 3.2.5 大鼠粪便样品中肠道菌群总DNA 的提取
• 3.2.6 DNA 检测
• 3.2.7 ERIC-PCR 反应
• 3.2.8 ERIC-PCR 产物的检测
• 3.2.9 ERIC-PCR 图谱分析
• 3.3 结果与讨论
• 3.3.1 脾虚动物模型的塑造
• 3.3.2 复方中药水提物的分离
• 3.3.3 中药复方各极性部位的肠道菌群指标评价结果
• 3.3.4 小结与讨论
• 第四章 结论与展望
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历
• 攻读学位期间发表的学术论文