蚕蛹虫草发酵物的饲料添加剂制备及药理学研究

论文摘要

中药作为饲料添加剂的主要目的是通过增强抗应激反应、抗氧化能力以及提高动物体的免疫力等功能以达到预防和治疗疾病的作用。蚕蛹及其培养的蛹虫草是一种高蛋白、多元素的营养物质，但由于多种原因导致其目前尚未大规模的开发利用。大量文献报道，蚕蛹和蛹虫草具有提高动物和人体的免疫功能以及抗氧化、抗应激等多种功效。本研究拟用干蚕蛹培养蛹虫草得到的发酵物为实验材料，以化学性氧化应激损伤和免疫损伤小鼠为单胃哺乳动物模型，对蚕蛹虫草发酵物作为单胃哺乳动物饲料添加剂的可行性进行探讨。本研究通过观察蚕蛹虫草菌丝体在平板培养基上的长势和长满培养基的时间，筛选得到最佳菌株（CM-2），其培养基菌丝体萌发最早，2d即可见白色新生菌丝；菌落直径增长速度快，菌丝体浓密，长满培养皿的时间短，只需14.6d。通过固体发酵培养后（培养基组成，干蚕蛹:玉米粉:培养液（蔗糖20g/l，蛋白胨5g/l，复合维生素0.04g/l，KH2PO41g/l，MgSO40.5g/l）=4:1:10）)，蚕蛹虫草发酵物中主要营养物质含量为：粗蛋白：49.24%，粗脂肪：20.18%，粗多糖：10.27%。通过研究蚕蛹虫草发酵物（CFSP）对正常小鼠体重、抗氧化及免疫功能的影响，探讨蚕蛹虫草发酵物作为单胃哺乳动物饲料添加剂的可行性，方法如下：将ICR小鼠随机分为对照组、CFSP添加剂高、中、低剂量组（6%、3%、1%），自由摄食饮水，每日称重，饲养14天，观察小鼠体重变化。试验结束后，检测小鼠免疫器官胸腺指数和脾脏指数；测定小鼠血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）活性及丙二醛（MDA）含量。实验结果表明，与普通饲料小鼠比较，各剂量CFSP添加剂具有促进小鼠体重增长的作用，提高小鼠免疫器官胸腺和脾脏指数，但因饲养周期较短，尚未达到统计显著性差异；血清ALT、AST活性及MDA含量与普通饲料组小鼠同样无显著性差异。选择四氯化碳致化学性氧化应激损伤小鼠为动物模型对蚕蛹虫草菌丝体水提物（WECM）作为单胃哺乳动物饲料添加剂的保健功效进行研究；将ICR小鼠随机分为正常组、模型组和WECM高、低剂量组（0.4、0.2g/kg）。除正常组外其余各组腹腔注射四氯化碳造模，给药21天后测定小鼠血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）活性及谷胱甘肽（GSH）和白介素-2（IL-2）、肿瘤坏死因子-a（TNF-a）、g-干扰素（IFN-g）的含量变化及小鼠肝组织超氧化物歧化酶（SOD）活力、丙二醛（MDA）含量变化。实验结果表明，WECM能显著提高四氯化碳致化学性应激损伤模型小鼠血清中GSH含量和肝组织超氧化物歧化酶SOD活力，降低脂质过氧化产物MDA含量，提高机体抗氧化能力；提高血清中免疫因子IL-2和IFN-g水平，降低TNF-a水平，提高机体免疫力。选择氢化可的松致免疫损伤模型小鼠为对象，以发酵物提取的蚕蛹虫草粗多糖（CMPS）为实验材料，进一步对蚕蛹虫草发酵物作为单胃哺乳动物饲料添加剂的活性成分进行探讨；试验方法如下：将ICR小鼠随机分为正常组、模型组和CMPS高、低剂量组（0.4、0.2g/kg）。除正常组外各组隔日皮下注射氢化可的松（25mg·kg-1· d-1）5次造模，给药结束后测定小鼠血清谷胱甘肽（GSH）和白介素-2（IL-2）、肿瘤坏死因子-a（TNF-a）、g-干扰素（IFN-g）的水平变化及小鼠肝组织（SOD）活力大小、丙二醛（MDA）含量变化。实验结果发现，CMPS可显著提高模型小鼠血清GSH含量和肝组织中超氧化物歧化酶SOD活力，降低脂质过氧化产物MDA含量，提高机体抗氧化能力；提高血清中细胞因子IL-2和IFN-g水平，降低TNF-a含量，通过调节机体免疫力以减轻氢化可的松造成的小鼠免疫损伤。本研究结果表明蚕蛹虫草发酵物具有提高机体抗氧化能力，减轻机体因脂质过氧化导致的应激损伤；同时通过调节机体免疫因子来提高机体免疫力，说明蚕蛹虫草发酵物作为单胃哺乳动物饲料添加剂是可行的；其中虫草多糖是发酵物的有效活性成分，其他有效成分有待进一步研究。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1.文献综述
• 1.1 蚕蛹
• 1.1.1 蚕蛹的营养价值
• 1.1.2 蚕蛹的药用价值
• 1.1.3 蚕蛹的利用
• 1.2 蚕蛹虫草
• 1.2.1 蚕蛹虫草的人工培养
• 1.2.2 蚕蛹虫草的药理作用
• 1.3 中药添加剂在饲料中的应用
• 1.3.1 中药饲料添加剂的分类
• 1.3.2 中药饲料添加剂的作用
• 2.引言
• 3.材料与方法
• 3.1 实验仪器、材料及实验动物
• 3.1.1 实验仪器
• 3.1.2 实验材料
• 3.1.3 实验动物
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 菌种活化
• 3.2.2 菌株的筛选
• 3.2.3 液体母钟培养
• 3.2.4 蛹虫草固体培养
• 3.2.5 发酵物中粗脂肪含量测定
• 3.2.6 发酵物中粗蛋白含量测定
• 3.2.7 发酵物中粗多糖含量测定
• 3.2.8 蚕蛹虫草发酵物 （CFSP）的制备
• 3.2.9 蚕蛹虫草菌丝体水提物（WECM）的制备
• 3.2.10 蚕蛹虫草粗多糖（CMPS）提取
• 3.2.11 饲料的制备
• 3.2.12 动物分组及处理
• 3.2.13 动物处理方法
• 3.2.14 小鼠胸腺指数、脾脏指数的测定
• 3.2.15 小鼠血清 AST 和 ALT 活性及 GSH、MDA 含量测定
• 3.2.16 小鼠肝脏 SOD 活性和 MDA 含量测定
• 3.2.17 小鼠肝脏组织切片标本制备
• 3.2.18 小鼠血清 IL-2、TNF-α、IFN-g含量测定
• 3.2.19 实验数据统计方法
• 4.结果与分析
• 4.1 蚕蛹虫草的固体发酵
• 4.1.1 菌株的筛选
• 4.1.2 蛹虫草固体发酵培养
• 4.2 蚕蛹虫草发酵物（CFSP）作为饲料添加剂的初步研究
• 4.2.1 CFSP 对小鼠体重变化的影响
• 4.2.2 CFSP 对小鼠血清 AST 和 ALT 活性的影响
• 4.2.3 CFSP 对小鼠血清 MDA 含量的影响
• 4.2.4 CFSP 对小鼠胸腺指数、脾脏指数的影响
• 4.3 蚕蛹虫草菌丝体水提物（WECM）对 CCl4 致小鼠氧化应激损伤的保护作用研究
• 4.3.1 WECM 对小鼠血清 AST 和 ALT 活性的影响
• 4.3.2 WECM 对小鼠血清 GSH 含量的影响
• 4.3.3 WECM 对小鼠肝脏 MDA 含量和总 SOD 活性的影响
• 4.3.4 小鼠肝组织的病理变化
• 4.3.5 小鼠血清 IL-2、TNF-α和 IFN-g水平变化
• 4.4 蚕蛹虫草粗多糖（CMPS）对氢化可的松致小鼠免疫损伤的保护作用
• 4.4.1 小鼠血清 GSH 含量及肝脏 MDA 含量和 SOD 活性变化
• 4.4.2 小鼠血清 IL-2、TNF-α和 IFN-g水平变化
• 4.4.3 注射 HC 小鼠的一般状态观察
• 5.讨论
• 5.1 蚕蛹虫草的固体发酵
• 5.2 蚕蛹虫草发酵物（CFSP）作为饲料添加剂的初步研究
• 5.2.1 发酵物添加剂对小鼠体重的影响
• 5.2.2 发酵物添加剂对小鼠血清的影响
• 5.2.3 发酵物添加剂对小鼠免疫器官指数的影响
• 5.3 蚕蛹虫草菌丝体水提物（WECM）对 CCl4 致小鼠氧化应激损伤的保护作用研究
• 5.4 蚕蛹虫草粗多糖（CMPS）对氢化可的松致小鼠免疫损伤的保护作用
• 6.结论
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介
• 硕士期间发表及待发表论文