利用琼脂糖凝胶CL-6B亲和层析纯化、分析植物半乳糖结合蛋白

论文摘要

关于植物凝集素分离提纯以及相关的生物学性质测定的报道，目前是个热点。具体的分离纯化方法有很多种，没有十分固定的模式。本研究根据琼脂糖凝胶CL-6B的特性，直接以其β-半乳糖苷键为配基，采用亲和层析技术从三种植物银杏、蓖麻子及苦瓜籽中分别纯化获得白果（银杏种子）、苦瓜籽、蓖麻子中的半乳糖结合蛋白，并对它们进化上的关系进行了初步的分析。实验结果证明了本方法一个步骤即可从粗提液中提取到较纯的半乳糖结合蛋白，较传统方法更加快捷高效，优越性明显。对研究结果的进一步分析表明，白果中的半乳糖结合蛋白只有结合半乳糖的B链亚基，而蓖麻子及苦瓜籽中的半乳糖结合蛋白是在B链亚基的基础上演化而成不同的类型，从而表现出不同的生物功能。本研究不仅为纯化半乳糖结合蛋白提供了理想的方法，而且结果对认识植物中半乳糖结合蛋白的演化极具意义。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 绪论
• 1.1 层析技术的概况
• 1.1.1 层析概论
• 1.1.2 层析的分类
• 1.1.3 亲和层析（Affinity chromatography，AC）
• 1.1.4 亲和层析的类型及应用
• 1.1.4.1 生物特异亲和层析法
• 1.1.4.2 人工配体亲和层析及其在蛋白质研究中的应用
• 1.1.4.3 亲和层析在蛋白质组学研究中的新发展
• 1.1.4.4 展望
• 1.1.5 新型层析介质的发展概况
• 1.1.5.1 双分散孔聚合物
• 1.1.5.2 软胶包裹硬胶表面（soft gel in a rigid shell）
• 1.1.5.3 触角型（tentade）吸附剂
• 1.1.5.4 粒度均匀的珠状交联多糖
• 1.1.6 交联琼脂糖（Sepharose CL）的性质及其应用
• 1.2 植物凝集素研究进展
• 1.2.1 植物凝集素的发现
• 1.2.2 植物凝集素定义的不断深化
• 1.2.3 植物凝集素的糖结合特异性
• 1.2.4 植物凝集素命名和分类
• 1.2.5 半乳糖结合蛋白
• 1.2.5.1 动物中的S-型凝集素（半乳凝素）
• 1.2.5.2 植物中的半乳糖结合蛋白
• 1.2.6 植物凝集素的生理功能
• 1.2.7 植物凝集素应用
• 1.2.7.1 在生物学及医学领域
• 1.2.7.2 在农林业病虫害防治领域
• 1.3 本研究的内容、 目的和意义
• 第2章 利用琼脂糖凝胶CL-6B纯化蓖麻子半乳糖结合蛋白
• 2.1 引言
• 2.2 实验材料
• 2.2.1 材料和层析介质
• 2.2.2 化学试剂、母液的配制
• 2.2.2.1 化学试剂
• 2.2.2.2 母液的配制
• 2.2.3 实验仪器
• 2.3 实验方法
• 2.3.1 蛋白粗提液的制备
• 2.3.2 琼脂糖凝胶CL-6B亲和层析
• 2.3.3 凝血活性与凝血活性抑制的测定
• 2.3.4 SDS-PAGE检测
• 2.4 实验结果与分析
• 2.4.1 亲和层析的结果
• 2.4.2 凝血活性与凝血活性抑制测定结果
• 2.4.3 SDS-PAGE的结果
• 2.5 讨论
• 第3章 利用琼脂糖凝胶CL-6B纯化苦瓜籽半乳糖结合蛋白
• 3.1 引言
• 3.2 实验材料
• 3.2.1 材料和层析介质
• 3.2.2 化学试剂、母液的配制
• 3.2.2.1 化学试剂
• 3.2.2.2 母液配制
• 3.2.3 实验仪器
• 3.3 实验方法
• 3.3.1 蛋白粗提液的制备
• 3.3.2 亲和层析
• 3.3.3 凝血活性及凝血活性抑制的测定
• 3.3.4 SDS-PAGE检测
• 3.4 实验结果与分析
• 3.4.1 亲和层析的结果
• 3.4.2 凝血活性及凝血活性抑制测定结果
• 3.4.3 SDS-PAGE的结果
• 3.5 讨论
• 第4章 利用琼脂糖凝胶CL-6B纯化白果半乳糖结合蛋白
• 4.1 引言
• 4.1.1 银杏资源的历史与现状
• 4.1.2 银杏的研究开发现状
• 4.2 实验材料
• 4.2.1 材料和层析介质
• 4.2.2 化学试剂、母液的配制
• 4.2.2.1 化学试剂
• 4.2.2.2 母液的配制
• 4.2.3 实验仪器
• 4.3 方法
• 4.3.1 粗品的制备
• 4.3.2 亲和层析
• 4.3.3 凝血活性的测定
• 4.3.4 SDS-PAGE检测
• 4.4 实验结果与分析
• 4.4.1 亲和层析的结果
• 4.4.2 凝血活性测定结果
• 4.4.3 SDS-RAGE的结果
• 4.5 小结
• 1、MCL和SGA的SDS-PAGE结果讨论'>4.6 RCA₁、MCL和SGA的SDS-PAGE结果讨论
• 第5章 小结与展望
• 5.1 关于纯化方法与结果
• 5.2 关于蛋白质纯化中应注意的问题
• 参考文献
• 攻读硕士学位期间发表的论文
• 致谢