越橘病害的诊断、鉴定与生物防治

论文摘要

自我国开展越橘引种工作到大规模产业化种植的过程中,越橘病害也随之发生,目前已发现的越橘病害主要分为侵染性病害和生理性病害两大类。侵染性病害以真菌性叶斑病发病最早,侵染面最广;而生理性病害以土壤缺素现象最为常见。本实验从病害发生严重的种苗繁育基地采集病叶标本,经分离纯化获得一株真菌,用涂抹法接种健康同种越橘植株叶片,得到与自然发病相同的症状,符合柯赫法则。首先根据该病原菌的菌落特征、显微镜下的菌丝和孢子体的形态结构进行鉴定,初步确定为拟盘多毛孢属。其次通过PCR扩增得到ITS和β-tubulin的部分核酸序列,登陆GenBank进行比对分析,准确鉴定该致病菌为棒孢拟盘多毛孢（Pestalotiopsis clavispora）。该工作确立了一种真菌型病害的准确鉴定方法。此外,选取健康越橘叶片,分离得到其内生真菌,根据形态学特征初步筛选出两种真菌,并对扩增得到的ITS序列分析后确定是钩状木霉（Trichoderma hamatum）和球状毛壳菌（Chaetomium globosum）。钩状木霉菌的10%、20%、30%发酵液对棒孢拟盘多毛孢的抑菌率分别为52.69%、67.31%、78.31%;球状毛壳菌的相应抑菌率为69.19%、74.47%、83.36%。对峙生长实验也证明这两种菌对棒孢拟盘多毛孢有很好的抑菌效果。此外对钩状木霉产几丁质酶活性的抗病机理和两种菌的生理特性也进行了研究。通过对这两种菌的分离鉴定为有效抑制棒孢拟盘多毛孢提供了一种潜在的生物防治途径。采用蛭石为栽培基质,将营养液中镁离子浓度在0.2—10 mmol/L范围内设计六个梯度适时补给越橘苗。两个月后,1—2.5mmol/L处理的植株生长正常。而高浓度处理的叶片出现焦枯,低浓度处理的叶片变黄或变红。通过对生长量、叶片光合参数和叶绿素含量等的综合分析得出基质中镁离子浓度为1.5mmol/L时最适于越橘苗生长,正常生长时叶片中镁元素的质量浓度在0.095%—0.11%范围内。上述实验为越橘苗镁元素的营养诊断及合理施加镁肥奠定了基础。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 1 文献综述
• 1.1 越橘简介
• 1.2 越橘侵染性病害的诊断鉴定及防治
• 1.2.1 越橘的病害类型
• 1.2.2 越橘主要的侵染性病害
• 1.2.3 越橘侵染性病害的诊断鉴定
• 1.2.4 侵染性病害的防治
• 1.2.5 内生真菌作为生防菌在植物侵染性病害防治上的应用
• 1.3 越橘生理性病害
• 1.3.1 概述
• 1.3.2 镁元素对越橘生长的影响及越橘缺镁的诊断
• 1.3.3 越橘易于发生缺镁的环境条件
• 1.3.4 越橘补镁的措施
• 1.4 实验的目的和意义
• 2 越橘叶斑病病原的分离、鉴定
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 病原的分离
• 2.1.3 病原的形态学鉴定
• 2.1.4 病原的分子生物学鉴定
• 2.2 结果与分析
• 2.2.1 病原真菌的分离
• 2.2.2 病原菌的形态学鉴定
• 2.2.3 病原菌的分子生物学鉴定
• 2.3 小结
• 3 抑制棒孢拟盘多毛孢的内生真菌的筛选
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 材料
• 3.1.2 越橘内生真菌的分离、纯化
• 3.1.3 内生真菌的形态学鉴定及初步筛选
• 3.1.4 内生真菌的分子生物学鉴定
• 3.1.5 对棒孢拟盘多毛孢的抑菌活性检测
• 3.1.6 产几丁质酶的鉴定及对其他致病菌的抑菌活性测定
• 3.1.7 内生真菌的生理特性分析
• 3.1.8 数据处理
• 3.2 结果与分析
• 3.2.1 分离、纯化得到的内生真菌
• 3.2.2 初步筛选后鉴定的真菌
• 3.2.3 对棒孢拟盘多毛孢的抑菌活性
• 3.2.4 钩状木霉产几丁质酶的鉴定
• 3.2.5 钩状木霉对其它致病菌的抑菌活性
• 3.2.6 可抑制棒孢拟盘多毛孢的内生真菌的生理特性
• 3.3 小结
• 4 镁离子对越橘苗生长的影响
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 材料
• 4.1.2 越橘苗的定植与培养
• 4.1.3 镁含量的测定
• 4.1.4 生长量的测定
• 4.1.5 叶片光合参数（Pn、Gs、Ci、E）的测定
• 4.1.6 叶绿素含量的测定
• 4.2 结果与分析
• 4.2.1 镁离子与叶片中镁含量的关系
• 4.2.2 镁离子对越橘苗生长量的影响
• 4.2.3 镁离子对叶片形态学的影响及与叶绿素含量之间的关系
• 4.2.4 基质中镁离子浓度与叶片光合参数之间的关系
• 4.3 小结
• 参考文献
• 附录A 培养基的配制方法
• 附录B 附图
• 攻读硕士学位期间发表学术论文情况
• 致谢