白细胞介素-13诱导HEL细胞分化及其机制的研究

论文摘要

目的: 研究重组人白细胞介素13（recombinant human interleukin 13,rhIL-13）诱导红白血病HEL（human erythroleukemia）细胞原癌基因c-fos 表达以及对HEL 细胞分化的影响,部分阐明IL-13 对细胞生长调控的信号转导机制。方法: 1.细胞培养: HEL细胞用含10%小牛血清的RPMI 1640液体培养基37℃, 5% CO2 常规培养。取生长状态良好的HEL 细胞,调整细胞密度为5×1081×109 /L,在细胞因子诱导前先经血清饥饿20 小时。2.总RNA 提取:以rhIL-13（100μg/L）分别诱导HEL 细胞不同时间,提取各组总体RNA,通过RNA电泳判断其是否符合实验要求。3.RT-PCR 方法:①检测rhIL-13 作用HEL 细胞0、4、24、48 小时,IL-13 受体α1（IL-13Rα1）的mRNA 表达;②检测rhIL-13 作用HEL 细胞0、15、30、60、120 分钟,原癌基因c-fos mRNA 的表达;③检测rhIL-13 与HEL 细胞共培养五天,HEL 细胞表面标志GPA（glycophorin A）,GP（glycoprotein）Ⅱb, vWF（von Willebrand Factor）等分化基因的mRNA 表达。4. Western Blotting 方法:取生长状态良好的HEL 细胞, 调整细胞密度为5×1081×109 /L,经过20h 的血清饥饿后,用rhIL-13（100μg/L）分别作用0、15、30、60、120 分钟,RIPA Buffer 裂解细胞提取蛋白质,用Western Blotting方法检测c-Fos 蛋白的表达。结果:①HEL 细胞表达IL-13Rα1 的mRNA。②rhIL-13 在15min 内诱导HEL细胞c-fos 的mRNA 表达（P<0.05）,30min 达到高峰（P<0.01）,60min 减弱至较

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