首页> 正文

TLR/NF-κB信号通路与其负性调控因子SIGIRR和IBD的关系

2020-12-02阅读(912)

TLR/NF-κB信号通路与其负性调控因子SIGIRR和IBD的关系

论文摘要

研究目的:探讨TLR/NF-κB信号通路在IBD致病中的作用及其抑制因子SIGIRR对LPS/TLR致炎信号通路负性调控的作用机制。为IBD的治疗提供新的靶点和方向。研究方法:⑴TLR4/NF-κB信号通路在溃疡性结肠炎患者肠黏膜中的变化及其相互之间关系的研究:采用SP免疫组化二步法检测了68例内镜活检的肠黏膜内TLR4和NF-κBP65的表达。68例包括:UC 53例（根据Tmelove-Richards分级分为:Ⅰ级9例,Ⅱ级15例,Ⅲ级19例）及正常对照者15例。⑵SIGIRR对巨噬细胞LPS/TLR信号通路的影响:①以未转染SIGIRR基因的巨噬细胞株Raw264.7为SIGIRR低表达株,采用脂质体转染技术将pUNO-mSIGIRR转入Raw264.7细胞,构建SIGIRR高表达细胞株;②分以下6组:对照组1:Raw264.7;对照组2: Raw264.7 + pUNO（空质粒）;对照组3: Raw264.7 cell + pUNO-mSIGIRR;实验组1:Raw264.7 cell +LPS;实验组2: Raw264.7 + pUNO （空质粒） + LPS;实验组3 : Raw264.7 cell + pUNO-mSIGIRR + LPS;实验组在质粒转染后,加入10ng/ml LPS培养12h;③用RT-PCR方法检测各组细胞SIGIRR、TLR2、TLR4、MyD88、IRAK-1和TRAF6 mRNA的表达。研究结果:⑴TLR4/NF-κB信号通路在溃疡性结肠炎患者肠黏膜中的变化及其相互之间关系的研究:①TLR4和NF-κB P65在UC患者肠黏膜中的表达分别为50/53（94.3%）和46/53（86.8%）显著高于正常对照者的6/1（540%）和5/15（33.3%）（P<0.01）,并且随着病变严重程度加重而增高;②UC患者肠黏膜内TLR4和NF-κB p65的表达呈显著正相关（r =0.923,P<0.01）。⑵SIGIRR对巨噬细胞LPS/TLR信号通路的影响:①转染了SIGIRR的Raw264.7细胞内SIGIRR mRNA的表达为0.470±0.045显著高于未转染和转染空质粒的Raw264.7细胞（0.210±0.021,0.212±0.027,P<0.001）。②无论是转染了还是未转染SIGIRR的Raw264.7细胞,经LPS作用后其SIGIRR mRNA的表达均显著低于对照组（0.114±0.052 vs 0.210±0.021, 0.109±0.047 vs 0.212±0.027, 0.302±0.036 vs 0.470±0.045）（P<0.001）。③LPS对转染和未转染SIGIRR的Raw264.7细胞TLR2 mRNA的表达均无影响（0.222±0.037 vs 0.218±0.036, 0.220±0.039 vs 0.215±0.035, 0.217±0.032 vs 0.205±0.029）（P>0.05）;同时SIGIRR对Raw264.7细胞内TLR2 mRNA的表达也无影响（P>0.05）;④无论是转染了还是未转染SIGIRR的Raw264.7细胞,经LPS作用后其TLR4 mRNA的表达均显著高于对照组（0.587±0.103 vs 0.309±0.046 , 0.564±0.092 vs 0.291±0.050, 0.558±0.085 vs 0.210±0.062）（P<0.001）;SIGIRR对Raw264.7细胞内TLR4 mRNA的表达无影响（P>0.05）;⑤未转染SIGIRR的Raw264.7细胞,经LPS作用后其MyD88 mRNA的表达均显著高于对照组（0.509±0.134 vs 0.890±0.144, 0.480±0.134 vs 0.974±0.166）（P<0.001）,而转染SIGIRR的Raw264.7细胞其MyD88 mRNA的表达在两组之间无显著差异（0.478±0.151 vs 0.341±0.130）（P>0.05）。在LPS作用组转染了SIGIRR的Raw264.7细胞其MyD88 mRNA的表达（0.341±0.130）显著低于未转染（0.890±0.144）和转染空质粒（0.974±0.166）的Raw264.7细胞（P<0.001）,但在对照组SIGIRR对MyD88 mRNA的表达无影响（0.509±0.134, 0.480±0.134, 0.478±0.151）（P>0.05）;⑥未转染SIGIRR的Raw264.7细胞,经LPS作用后其IRAK1 mRNA的表达均显著高于对照组（0.964±0.208 vs 0.522±0.096, 1.042±0.256 vs 0.491±0.121）（P<0.001）,而转染SIGIRR的Raw264.7细胞IRAK1 mRNA的表达在两组之间无显著差异（0.440±0.114 vs 0.530±0.134）（P>0.05）;在LPS作用组转染了SIGIRR的Raw264.7细胞其IRAK1 mRNA的表达（0.440±0.114）显著低于未转染（0.964±0.208）和转染空质粒（1.042±0.256）的Raw264.7细胞（P<0.001）,但在对照组SIGIRR对IRAK1 mRNA的表达无影响（0.522±0.096, 0.491±0.121, 0.530±0.134）（P>0.05）;⑦无论是转染了还是未转染SIGIRR的Raw264.7细胞,经LPS作用后其TRAF-6 mRNA的表达均显著高于对照组（0.458±0.039 vs 0.263±0.051, 0.444±0.049 vs 0.268±0.043, 0.320±0.061 vs 0.247±0.034） （P<0.001或P<0.01）;在LPS作用组转染了SIGIRR的Raw264.7细胞其TRAF-6 mRNA的表达（0.320±0.061）显著低于未转染（0.458±0.039）和转染空质粒（0.444±0.049）的Raw264.7细胞（P<0.001）,但在对照组SIGIRR对TRAF-6 mRNA的表达无影响（0.263±0.051, 0.268±0.043, 0.247±0.034）（P>0.05）。结论1、UC患者肠黏膜TLR4和NF-κB p65的表达均显著上调,这可能增加肠上皮细胞、固有层单个核细胞对肠腔内的细菌和内毒素的敏感性,产生过激的免疫炎症反应,导致IBD的发生。2、UC患者肠黏膜TLR4和NF-κB p65的表达随着患者肠黏膜病理分级加剧而增加,提示TLR4/ NF-κB通路参与了UC的发生发展。3、LPS可显著抑制巨噬细胞Raw264.7内SIGIRR的表达,同时上调TLR4和其信号通路的下游分子（MyD88、IRAK-1和TRAF6）的表达。4、给予外源性SIGIRR基因可阻断LPS对TLR信号通路的激活,下调MyD88、IRAK-1和TRAF6的表达,这可能是其对TLR信号通路的负性调控机制之一。5、给予外源性SIGIRR基因对无LPS作用的巨噬细胞Raw264.7的TLR信号通路无影响,但是可阻断LPS对TLR信号通路的激活,从而抑制LPS诱导的免疫炎症反应,因此,SIGIRR有望作为IBD乃至其它炎症性疾病的治疗靶点。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 第一章 引言
  • 第二章 TLR4/NF-ΚB 信号通路在溃疡性结肠炎患者肠黏膜中的变化及其相互之间的关系
  • 2.1 材料与方法
  • 2.1.1 研究对象
  • 2.1.2 主要试剂
  • 2.1.3 主要仪器
  • 2.1.4 方法
  • 2.1.5 统计学处理
  • 2.2 结果
  • 2.2.1 TLR4 表达与溃疡性结肠炎及其严重程度的关系
  • 2.2.2 NF-κB p65 表达与溃疡性结肠炎及其严重程度的关系
  • 2.2.3 溃疡性结肠炎患者肠黏膜中TLR4 和NF-κB p65表达间的相互关系
  • 2.3 讨论
  • 2.3.1 TLR 信号通路与IBD
  • 2.3.2 NF-κB 与IBD
  • 2.4 结论
  • 第三章 SIGIRR 对巨噬细胞LPS/TLR 信号通路的影响
  • 3.1 材料与方法
  • 3.1.1 材料
  • 3.1.2 方法
  • 3.1.3 统计学处理
  • 3.2 结果
  • 3.2.1 提取质粒的PCR 鉴定结果
  • 3.2.2 SIGIRR 转染结果
  • 3.2.3 LPS 对转染和未转染SIGIRR 的Raw264.7 细胞内51GIRR mRNA 表达的影响
  • 3.2.4 LPS 对转染和未转染SIGIRR 的Raw264.7 细胞内TLR2 mRNA 表达的影响
  • 3.2.5 LPS 对转染和未转染SIGIRR 的Raw264.7 细胞内TLR4 mRNA 表达的影响
  • 3.2.6 LPS 对转染和未转染SIGIRR 的Raw264.7 细胞内MyD88 mRNA 表达的影响
  • 3.2.7 LPS 对转染和未转染SIGIRR 的Raw264.7 细胞内1RAK1 mRNA 表达的影响
  • 3.2.8 LPS 对转染和未转染SIGIRR 的Raw264.7 细胞内TRAF-6 mRNA 表达的影响
  • 3.3 讨论
  • 3.4 结论
  • 参考文献
  • 致谢
  • 研究生在读期间发表论文
  • 综述

    • 相关论文文献

    • [1].信号通路在肾纤维化发生机制中作用的研究进展[J]. 山东医药 2020(02)
    • [2].调控乳蛋白合成信号通路的研究进展[J]. 中国奶牛 2020(05)
    • [3].Wnt信号通路在结直肠侧向发育型肿瘤中的研究进展[J]. 胃肠病学 2018(11)
    • [4].Ras/Raf/MEK/ERK信号通路参与自噬调控作用的研究进展[J]. 中国药科大学学报 2017(01)
    • [5].雌激素-雌激素受体信号通路对趋化因子的调控作用研究进展[J]. 生殖医学杂志 2017(09)
    • [6].Hedgehog信号通路在肺癌中的研究进展[J]. 健康之路 2016(09)
    • [7].黄酮类化合物对免疫相关信号通路的调控作用研究进展[J]. 动物医学进展 2019(12)
    • [8].JAK2/STAT3/HIF-1α信号通路对脑卒中的影响[J]. 新医学 2020(01)
    • [9].慢性炎症分子基础及信号通路在膀胱癌中的作用[J]. 医学信息 2020(19)
    • [10].分子信号通路在类风湿关节炎发病机制中的研究进展[J]. 风湿病与关节炎 2020(09)
    • [11].COX-2与EGFR信号通路的联合抑制在晚期非小细胞肺癌治疗中的应用[J]. 中国胸心血管外科临床杂志 2016(03)
    • [12].转化生长因子-β信号通路与结直肠癌关系的研究进展[J]. 中华实用诊断与治疗杂志 2020(11)
    • [13].Wnt信号通路在中枢神经系统中的作用及相关机制[J]. 江苏医药 2018(08)
    • [14].Wnt信号通路在骨骼肌损伤修复过程中的作用及机制研究[J]. 生命的化学 2018(05)
    • [15].分子信号通路在瘢痕疙瘩中的研究进展[J]. 海南医学 2017(07)
    • [16].ARDS发病机制的相关信号通路研究进展[J]. 中国实验诊断学 2017(09)
    • [17].P38MAPK信号传导通路在HF治疗中的应用[J]. 环球中医药 2015(S1)
    • [18].海洋无脊椎动物甲状腺激素信号通路的研究进展[J]. 生物技术通报 2014(10)
    • [19].乳蛋白合成信号通路的研究进展[J]. 中国畜牧兽医 2013(01)
    • [20].河马信号通路在糖尿病肾纤维化中的研究现状[J]. 中国临床药理学杂志 2020(16)
    • [21].信号通路在心脏再生中的作用[J]. 通讯世界 2019(03)
    • [22].果蝇JNK信号通路的研究进展[J]. 生物学杂志 2019(03)
    • [23].Wnt信号通路在血管新生和钙化中的作用[J]. 遵义医学院学报 2019(04)
    • [24].中药抗肿瘤机制中的11种信号通路[J]. 中国实验方剂学杂志 2018(21)
    • [25].音猬因子信号通路与骨质疏松症关系的研究进展[J]. 中国骨质疏松杂志 2017(04)
    • [26].水产动物雷帕霉素受体信号通路的研究进展[J]. 海洋科学 2016(01)
    • [27].核因子-κB信号通路与缺血性心脏病关系的研究进展[J]. 中国老年学杂志 2016(12)
    • [28].神经干细胞增殖和分化相关信号通路的研究进展[J]. 临床神经外科杂志 2013(04)
    • [29].牙根发育启动相关信号通路的研究进展[J]. 牙体牙髓牙周病学杂志 2011(09)
    • [30].毛囊干细胞增殖与分化相关信号通路研究进展[J]. 中国修复重建外科杂志 2010(02)

    标签：;  ;  ;  

    TLR/NF-κB信号通路与其负性调控因子SIGIRR和IBD的关系
    下载Doc文档

    猜你喜欢

    © 2024 毕速过 版权所有 鄂ICP备12018319号-5