肝脏部分切除对肝脏干细胞增殖的影响

论文摘要

目前,肝移植虽已成为治疗终末期肝病的重要手段,但供体短缺、手术损伤、免疫排斥以及费用高昂等问题构成了肝移植技术发展的主要障碍。因此,开展具有侵入性小,并发症少等特点的肝脏细胞移植（Hepatocyte transplantation,HTx）具有重要临床意义。肝脏细胞移植分为肝细胞移植与肝脏干细胞移植。成熟肝细胞虽然具有一定再生能力,可在一定程度上重构肝脏,但临床实验中,肝细胞移植往往因为细胞数量不足或再生能力有限,而不能产生充分、长期的生物学作用。肝脏干细胞具有长时间持续扩增的能力,能在体外扩增达到临床所需的细胞数量,且移植后在体内也可增生。所以,肝脏干细胞移植可能在肝脏再生治疗（Therapeutic liver repopulation）中发挥更重要的作用。目的:通过肝脏部分切除的方法构建SD大鼠肝干细胞增殖模型,并检测部分切除后存留肝脏中干细胞的增殖。方法:采用部分肝切除法建立大鼠肝叶切除模型并按切除比例分组;使用IV型胶原酶法提取,分离切除部分肝脏后存留的肝脏中的细胞,贴壁后进行体外接种培养;培养过程中向RPMI1640中加入肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）、纤维母细胞生长因子-4（fibroblast growth factor-4,FGF-4）,对贴壁细胞诱导;应用流式细胞仪检测不同组别肝脏干细胞CD34、Thy的表达;光镜下对比观察各组肝脏干细胞的含量和生长情况;免疫荧光法鉴定各组肝脏干细胞AFP、CK18的表达;Western Blot检测细胞中AFP的表达并进行统计学分析。结果:1.通过切除SD大鼠不同比例的肝叶组织构建大鼠肝叶切除的模型。2.胶原酶法提取、分离出圆形及类圆形贴壁细胞,经体外培养可见细胞呈集团、集落样生长,说明有肝脏干细胞的增殖。3.流式细胞仪检测到肝脏部分切除后第7天存留肝脏的细胞中CD34、Thy呈阳性表达,其中CD34含量为2.6%,Thy含量为1.3%;未做肝脏切除的对照组肝脏细胞中CD34、Thy呈阴性表达。4.免疫荧光检测SD大鼠肝脏切除83.4%后存留的肝脏细胞中AFP、CK18呈强阳性表达;肝脏切除73.1%后的存留肝脏细胞中AFP、CK18呈阳性表达;在未切除的对照组中呈阴性表达。术后第7天存留肝脏细胞中AFP、CK18呈强阳性表达;术后当天存留肝脏细胞中AFP、CK18呈阳性表达;术后第14天存留肝脏细胞中AFP、CK18呈阴性表达。肝脏部分切除后存留鼠肝灌洗15分钟后细胞中AFP、CK18呈强阳性表达;肝脏部分切除后存留鼠肝灌洗10分钟后的细胞中AFP、CK18呈阳性表达;肝脏部分切除后存留鼠肝灌洗20分钟后的细胞中AFP、CK18呈阴性表达。5.Western Blot检测到肝部分切除后存留肝脏细胞中AFP呈阳性表达。切除肝脏83.4%后存留肝脏细胞中AFP的表达与切除73.1%后存留肝脏细胞中AFP的表达相比较,未见显著差异,P≥0.05。存留鼠肝灌洗15分钟后的肝脏细胞与存留鼠肝灌洗10分钟后的肝脏细胞的AFP表达相比较,明显升高,P﹤0.05。术后第7天与术后当天的存留肝脏细胞中AFP表达相比较,明显升高,P﹤0.05。结论:1.SD大鼠切除肝脏83.4%的存留肝脏含有肝脏干细胞的数量最多,切除肝脏73.1%的存留鼠肝中含有的肝脏干细胞的数量次之,未切除肝脏的鼠肝含有干细胞的数量最少。2.术后第7天存留鼠肝中肝脏干细胞的数量最多,术后当天存留鼠肝中肝脏干细胞的数量次之,术后第14天存留鼠肝中肝脏干细胞的数量最少。3.胶原酶灌洗存留鼠肝15分钟后的肝脏中含有干细胞的数量最多,灌洗存留鼠肝10分钟后的肝脏中含有干细胞的数量次之,灌洗存留鼠肝20分钟后的肝脏中含有干细胞的数量最少。

论文目录

• 一、摘要
• （一） 中文摘要
• （二） 英文摘要
• 二、正文
• （一） 前言
• （二） 材料与方法
• （三） 结果
• （四） 讨论
• （五） 结论
• （六） 参考文献
• 三、综述
• （一） 正文
• （二） 参考文献
• 四、致谢