造血干细胞移植患者骨髓单个核细胞幼红巨噬细胞黏附蛋白表达的探讨

论文摘要

第一部分FQ-RT-PCR检测EMP mRNA的方法学建立和评价目的：采用Taqman探针技术,建立荧光定量逆转录聚合酶链反应（FQ-RT-PCR）检测幼红巨噬细胞黏附蛋白（EMP）mRNA的方法并对方法学进行评价。方法：用primer2.0软件设计EMP引物和Taqman探针,优化反应体系,建立EMP mRNA的FQ-RT-PCR方法。用pGEM-TEasy载体与普通PCR扩增所得的EMP cDNA片段进行连接,构建重组质粒作为标准品,并进行方法学评价。结果：本方法检测灵敏度为5拷贝/ml,线性范围为7～7×107拷贝/ml,Ct值与拷贝数之间具有良好的线性关系。批内、批间变异系数分别为2.80～3.15%和3.45-4.50%。扩增产物克隆和测序分析显示扩增片段为EMP特异性序列。结论：成功建立了FQ-RT-PCR检测EMP mRNA的方法,本方法具有敏感、特异、准确、重复性好等特点关键词：幼红巨噬细胞黏附蛋白；mRNA;荧光定量逆转录聚合酶链反应第二部分造血干细胞移植（HSCT）患者骨髓单个核细胞EMP的表达目的：检测幼红巨噬细胞黏附蛋白（EMP）在HSCT患者表达水平的变化,以探讨EMP表达与骨髓红系造血功能的关系。方法：10名健康骨髓捐献者和46名血液病患者HSCT前（进行预处理后）分别设为第1组和第2组；该46名血液病患者在HSCT后的不同时间点（HSC’后第30天、第90天和第180天）分别设为第3组、第4组和第5组。采集各组患者骨髓3 ml,分离单个核细胞。骨髓标本均进行形态学分析,观察骨髓增生程度并计数红系造血岛数量。分别FQ-RT-PCR和Western blot方法检测EMP mRNA和EMP蛋白的表达水平结果：第1组和第2组用Western blot方法未检测到EMP蛋白,但是可用FQ-RT-PCR方法检测到EMP mRNA表达。第3、4、5三组骨髓中均可检测到EMPmRNA和EMP蛋白,其表达水平和骨髓平均红系造血岛数量均明显高于两个对照组。结论：骨髓红系增生旺盛,造血岛数量增加时EMP表达水平可明显增加,EMP在一定程度上可反映骨髓红细胞系统的造血状态。

论文目录

• 中英文缩略词表
• 前言
• 参考文献
• 摘要
• Abstract
• 第一部分 FQ-RT-PCR检测EMP mRNA的方法建立和方法学评价
• 引言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 第二部分 HSCT患者骨髓单个核细胞EMP的表达
• 引言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 结论
• 创新点
• 展望
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 附录一 攻读学位期间发表论文及参与申报课题
• 附录二 Accepted letter for published in Transplantation Proceedings