腺苷脱氨酶检测方法及其应用研究

论文摘要

腺苷脱氨酶是一种与机体免疫系统有重要联系的核酸分解代谢酶类，可特异性催化腺苷产生不可逆的脱氨反应。通过测定单位时间内底物的减少量或生成物的增加量，建立了腺苷脱氨酶活性的三种检测方法。通过正交设计与单因素试验相结合，确定了酶活性测定的最佳条件。用于临床检验，结果满意。 四酶偶联法测定体液中腺苷脱氨酶的活性 本方法在ADA催化腺苷水解生成氨和次黄（嘌呤核）苷反应的基础上，再依次偶联三个酶促反应，次黄苷经嘌呤核苷磷酸化酶（PNP）催化水解生成次黄嘌呤，再经黄嘌呤氧化酶催化氧化产生H2O2，最后经过氧化物酶（POD）催化的Trinder反应产生红色醌类化合物。通过测定500nm处吸光度的上升速率（△A／min）即红色醌类化合物生成速率来测定ADA活性。新建立的四酶偶联法既能用于手工操作，又能用于自动生化分析仪的ADA检测。在pH7.40，底物溶液中腺苷和PNP，显色剂中苯酚、POD和XOD浓度分别为6.00×10-3mol／L、42U／L、1.50g／L、5500U／L、20U／L时，酶显示最大活性。方法的线性范围为0～120U／L。手工操作法的批内、批间相对标准偏差分别为1.59％～2.22％、1.96％～3.10％；全自动法的批内、批间相对标准偏差分别为1.55％～2.18％、1.85％～2.93％。用手工操作和自动生化分析仪测定同一样本，经配对t检验，差异无显著性意义（P＞0.05）。 双酶偶联法测定体液中腺苷脱氨酶的活性 本方法在ADA催化腺苷脱氨反应的同时，偶联一个α-酮戊二酸在还原剂NADH作用下经谷氨酸脱氢酶（GLDH）催化的氨化还原反应。本研究采用全自动分析方法，通过测定340nm处吸光度的下降速率

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一章 前言
• 1 腺苷脱氨酶的生物学特性
• 2 腺苷脱氨酶活性检测的临床意义
• 3 腺苷脱氨酶活性检测
• 第二章 四酶偶联法测定体液中腺苷脱氨酶的活性
• 1 引言
• 2 实验部分
• 2.1 实验原理
• 2.2 实验仪器
• 2.3 实验试剂
• 2.4 实验方法
• 3 结果与讨论
• 4 结论
• 第三章 双酶偶联法测定体液中腺苷脱氨酶的活性
• 1 引言
• 2 实验部分
• 2.1 实验原理
• 2.2 实验仪器
• 2.3 实验试剂
• 2.4 实验方法
• 3 结果与讨论
• 4 结论
• 第四章 催化光度法测定体液中腺苷脱氨酶的活性
• 1 引言
• 2 实验部分
• 2.1 实验原理
• 2.2 实验仪器
• 2.3 实验试剂
• 2.4 实验方法
• 3 结果与讨论
• 4 结论
• 参考文献
• 主要缩写符号与对照
• 综述
• 附录: 已/待发表论文
• 致谢