肾上腺皮质癌干细胞富集策略的实验研究

论文摘要

背景肿瘤干细胞理论提出肿瘤细胞的组成具有异质性,肿瘤中含有较少比例的具有自我更新能力、分化潜能、高致瘤性的细胞,称为肿瘤干细胞,也叫做癌干细胞。癌干细胞的研究表明,癌干细胞可以通过无血清悬浮培养、化疗药物作用、建立裸鼠皮下移植瘤富集。利用癌干细胞表面标志物对富集得到的细胞进行分离、纯化从而得到纯度较高的癌干细胞,以便于对其进行生物学特性及表面标志表达的研究。目的1、对SW-13细胞进行体外增殖能力的检测；2、探讨能否通过无血清悬浮培养、广谱化疗药阿霉素干预作用及建立裸鼠皮下移植瘤富集得到肾上腺皮质癌干细胞样细胞；3、研究肾上腺皮质癌干细胞样细胞“干性”基因CD44, CD133、CXCR4及ABCG2的表达情况。方法1、检测肾上腺皮质癌细胞系SW-13细胞生长曲线,单个SW-13细胞在平板中及软琼脂中集落形成实验；2、对SW-13细胞进行无血清悬浮培养、12ug/ml阿霉素干预培养及注射入裸鼠皮下建立皮下移植瘤富集肾上腺皮质癌干细胞样细胞。3、收集以上细胞,检测癌干细胞表面标志物CD44、CD133、CXCR4及ABCG2在以上三种富集策略所营造的微环境中的表达情况。结果1、SW-13细胞体外克隆增殖能力强,在平板及软琼脂中克隆形成率高；2、SW-13细胞能在无血清悬浮培养基中形成球囊状细胞团,对阿霉素耐药,在裸鼠皮下形成移植肿瘤,这三种方法均富集到了肾上腺皮质癌干细胞样细胞；3、富集得到的肾上腺皮质癌干细胞样细胞高表达癌干细胞标志CD44,稳定的低表达ABCG2, CD133及CXCR4在三种不同环境中表达存在差异。在无血清悬浮培养基条件下,CD44的表达率：97.07+2.58%,CD133的表达率：3.39-4-3.01%,CXCR4的表达率：23.01+12.06%,ABCG2的表达率：1.12±1.65%；在含阿霉素的培养基中,CD44的表达率：57.64-4-7.48%,CD133的表达率：7.16±2.83%,CXCR4的表达率：24.58+10.56%,ABCG2的表达率：0.31±0.75%；在裸鼠皮下移植瘤,CD44的表达率：94.46+2.31%,CD133的表达率：1.36+1.88%,CXCR4的表达率：77.10±13.92%,ABCG2的表达率：0.53+0.52%。结论肾上腺皮质癌细胞系SW-13细胞中出现了一部分具有癌干细胞特性的细胞。无血清悬浮培养、阿霉素干预培养、裸鼠皮下移植瘤可以富集SW-13细胞中具有癌干细胞特性的肾上腺皮质癌干细胞样细胞。通过检测并分析以上三种富集策略所营造的微环境癌干细胞相关标志在肾上腺皮质癌干细胞样细胞中的表达情况发现, CD44可能是肾上腺皮质癌恶性的表面标志,CXCR4可能对肾上腺皮质癌裸鼠体内成瘤及转移具有重要作用,CD133和ABCG2可能作为肾上腺皮质癌干细胞分选候选标志。

论文目录

• 主要英文缩略词表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 一、材料与方法
• 二、实验结果
• 三、讨论
• 全文小结
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 就读硕士研究生期间完成的论文及参与的科研工作