糖皮质激素性骨质疏松症大鼠“骨肉不相亲”病理机制及中医不同治法的比较研究

论文摘要

目的:本研究采用分子生物学的方法,以骨质疏松症大鼠的骨骼、骨骼肌中钙代谢、Ⅰ型胶原、能量代谢的相关酶学表达等为研究核心,阐述骨骼肌收缩与骨骼协调性对骨质疏松症形成的影响,并且观察补肾方法、健脾方法、活血化瘀方法对骨质疏松症的防治效果和作用机制的异同。该研究为临床提高骨质疏松症的防治效果、选择最佳的治疗方案提供科学的实验依据。材料与方法:本实验采用地塞米松肌肉注射方法建立骨质疏松症动物模型,以补肾方法、健脾方法、活血化瘀方法对模型大鼠进行防治,同时选用骨疏康颗粒剂作为阳性对照药,正常大鼠作为标准对照,模型大鼠作为空白对照组,造模及给药时间为9周。9周后处死动物进行取材及实验指标检测:①应用双能X线骨密度仪检测离体股骨的骨密度（BMD）;②用生化方法检测血清抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）、碱性磷酸酶（ALP）、血钙和血磷;③用ELISA方法检测骨骼肌的肌钙蛋白和Ca2+-Mg2+-ATP酶等指标;④用PCR法及Western印迹法检测各组大鼠骨组织、骨骼肌的骨钙素、Ⅰ型胶原、Na+-K+-ATP酶的mRNA和蛋白表达。结果:1.大鼠离体股骨上1/3骨密度检测结果显示:与正常组比较,模空组大鼠离体股骨上1/3骨密度极显著降低（P<0.01）;与模空组比较,各治疗组大鼠股骨上1/3骨密度均有不同程度的升高,其中以补肾中药组升高最为显著（P<0.01）。2.大鼠骨代谢生化指标结果显示:①与正常组比较,模空组大鼠血清ALP含量有升高趋势,但不具有统计学意义;与模空组比较,各治疗组大鼠的血清ALP含量均升高,其中以活血组升高最为明显,具有统计学意义（P<0.05）。②与正常组比较,模空组大鼠血清TRAR含量升高极为显著（P<0.01）;与模空组比较,各治疗组大鼠血清TRAR含量均明显降低,其中以补肾组和骨疏康组降低最为明显,与其他各组比较具有极显著差异（P<0.01）。③与正常组比较,模空组大鼠血钙含量明显升高,但不具有统计学意义;与模空组比较,各治疗组大鼠血钙含量均明显升高,其中以补肾组和骨疏康组升高最为明显,与其他各组比较具有极显著差异（P<0.01）。④各组大鼠血磷含量变化不明显,治疗组中骨疏康组血磷含量升高,与正常组比较具有显著差异（P<0.01）。3.大鼠骨组织骨钙素、骨骼肌钙蛋白指标结果显示:①与正常组相比,模空组大鼠骨组织骨钙素mRNA表达水平明显下降（P<0.05）,与模空组相比,各治疗组大鼠骨钙素mRNA表达水平均有不同程度的升高,其中补肾组升高趋势最为显著（P<0.01）。与正常组比较,模空组大鼠骨钙素的蛋白表达明显降低,但统计比较无显著差异;与模空组比较,各治疗组大鼠骨钙素的蛋白表达均明显升高,其中补肾组升高趋势最显著（P<0.01）。②与正常组比较,各组大鼠骨骼肌的肌钙蛋白显著降低（P<0.01）;与模空组比较,补肾组大鼠肌钙蛋白均明显升高（P<0.01）;补肾组大鼠骨骼肌的肌钙蛋白升高最为明显,明显高于其他各组,具有显著性差异（P<0.01）;活血组大鼠骨骼肌的肌钙蛋白升高程度最低,与正常组、模空组、补肾组比较具有显著统计学差异（P<0.01）。4.大鼠骨组织、骨骼肌Ⅰ型胶原指标结果显示:①与正常组相比,模空组大鼠骨组织Ⅰ型胶原mRNA表达水平明显下降（P<0.05）,与模空组相比,各治疗组大鼠的Ⅰ型胶原mRNA表达水平均有不同程度的升高,其中补肾组升高趋势最为显著（P<0.01）,其次为健脾组（P<0.05）,活血组升高程度略低,与补肾组相比有显著差异（P<0.05）;骨疏康组升高程度最低,与补肾组相比有极显著差异（P<0.01）。与正常组比较,各组大鼠骨组织Ⅰ型胶原的蛋白表达均明显下降（P<0.01）;与模空组比较,各治疗组大鼠Ⅰ型胶原的蛋白表达均明显升高,其中补肾组、骨疏康组升高趋势最显著（P<0.01）。②与正常组相比,模空组大鼠骨骼肌Ⅰ型胶原mRNA表达水平明显下降（P<0.01）,与模空组相比,各治疗组大鼠的骨骼肌Ⅰ型胶原mRNA表达水平均有不同程度的升高,其中补肾组、健脾组升高趋势最为显著,与模空组比较均有极明显差异（P<0.01）。与正常组比较,各组大鼠骨骼肌Ⅰ型胶原的蛋白表达均明显下降（P<0.01）;与模空组比较,各治疗组大鼠骨骼肌Ⅰ型胶原的蛋白表达均明显升高（P<0.01）,其中补肾组升高趋势最明显。5.大鼠骨组织、骨骼肌能量代谢指标结果显示:①与正常组相比,模空组大鼠骨组织Na+-K+-ATP酶mRNA表达水平明显下降（P<0.05）,与模空组相比,各治疗组大鼠Na+-K+-ATP酶mRNA表达水平均有不同程度的升高,其中补肾组升高趋势最为显著,与模空组比较有极明显差异（P<0.01）,其次为健脾组（P<0.01）,是正常组的2.43倍;活血组升高程度最低,与补肾组、健脾组相比均有极显著差异（P<0.01）。②与正常组相比,模空组大鼠骨骼肌中Na+-K+-ATP酶mRNA表达水平明显下降（P<0.01）,与模空组相比,各治疗组大鼠的骨骼肌Na+-K+-ATP酶mRNA表达水平均有不同程度的升高,其中健脾组升高趋势最为显著,与模空组比较有极明显差异（P<0.01）,是正常组的1.00倍,其次为补肾组（P<0.01）,是正常组的0.68倍;活血组与骨疏康组升高程度最低。③与正常组比较,其他各组大鼠骨骼肌的Ca2+-Mg2+-ATP酶显著降低（P<0.01）;与模空组比较,各治疗组大鼠骨骼肌的Ca2+-Mg2+-ATP酶均明显升高（P<0.01）;补肾组大鼠骨骼肌的Ca2+-Mg2+-ATP酶升高最为明显,明显高于骨疏康组、活血组、健脾组,差异具有统计学意义（P<0.01）结论:1.运用地塞米松2.5mg/kg,一周两次,连续9周,后肢臀部肌肉注射,可以成功诱导骨质疏松症大鼠模型。2.地塞米松可导致大鼠骨组织骨钙素、Ⅰ型胶原、Na+-K+-ATP酶基因和蛋白表达水平下降;骨骼肌中肌钙蛋白、Ca2+-Mg2+-ATP酶、Ⅰ型胶原、Na+-K+-ATP酶基因和蛋白表达水平下降。提示骨组织、骨骼肌能量代谢与协调性下降,可能是糖皮质激素诱导的骨质疏松症发生的重要机制之一。3.补肾中药通过有效提高骨质疏松症大鼠骨组织、骨骼肌的钙代谢、Ⅰ型胶原和能量代谢相关基因的表达水平,提高骨质疏松症大鼠骨组织、骨骼肌的能量代谢,从而促进骨形成,抑制骨吸收,对糖皮质激素诱导的骨质疏松症有明显的防治作用。4.健脾中药通过提高骨骼肌的钙代谢、Ⅰ型胶原和能量代谢相关基因的表达水平,提高骨质疏松症大鼠骨骼肌的能量代谢,进而有效的保护骨骼,提高骨骼与肌肉的协调性,促进骨形成,对糖皮质激素诱导的骨质疏松症有一定的防治作用。5.通过骨质疏松症大鼠骨骼、骨骼肌钙代谢、Ⅰ型胶原和能量代谢相关基因的表达变化影响,比较补肾中药、健脾中药、活血化瘀中药的防治效果,认为补肾方法〉健脾方法〉活血化瘀方法。说明补肾方法是防治骨质疏松症的基本治法,健脾方法是辅助补肾方法治疗骨质疏松症的一个重要治法。

论文目录

• 中英文名词术语对照
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 文献综述
• 文献综述一 中医不同治法对骨质疏松症治疗效果的研究进展
• 参考文献
• 文献综述二 骨质疏松症骨骼与肌肉相关性的研究进展
• 参考文献
• 第一部分 糖皮质激素性骨质疏松症大鼠模型的建立及评价
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 观察指标及测定方法
• 4 结果
• 第一部分 实验小结
• 第二部分 中医不同治法对骨质疏松症大鼠骨组织、骨骼肌钙代谢影响的比较研究
• 实验一 中医不同治法对骨质疏松症大鼠骨组织骨钙素（BGP）mRNA 和蛋白表达影响的比较研究
• 实验二 中医不同治法对骨质疏松症大鼠骨骼肌肌钙蛋白浓度 影响的比较研究
• 第二部分 实验小结
• 第三部分中医不同治法对骨质疏松症大鼠骨组织、骨骼肌Ⅰ型胶原影响的比较研究
• 实验一 中医不同治法对骨质疏松症大鼠骨组织Ⅰ型胶原 mRNA 和蛋白表达影响的比较研究
• 实验二 中医不同治法对骨质疏松症大鼠骨骼肌Ⅰ型胶原 mRNA 和蛋 白表达影响的比较研究
• 第三部分 实验小结
• 第四部分中医不同治法对骨质疏松症大鼠骨组织、骨骼肌能量代谢影响的比较研究
• 实验一 中医不同治法对骨质疏松症大鼠骨组织 Na+-K+-ATP 酶 mRNA 表达影响的比较研究
• 实验二 中医不同治法对骨质疏松症大鼠骨骼肌 Na+-K+-ATP 酶 mRNA 表达影响的比较研究
• 实验二 中医不同治法对骨质疏松症大鼠骨骼肌 Na+-K+-ATP 酶 mRNA 表达影响的比较研究
• 2+-Mg²⁺-ATP 酶 浓度影响的比较研究'>实验三 中医不同治法对骨质疏松症大鼠骨骼肌 Ca²⁺-Mg²⁺-ATP 酶 浓度影响的比较研究
• 第四部分 实验小结
• 分析讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历