段慧英宋秋玲吕艳通讯作者
曲靖医学高等专科学校云南曲靖655000
【摘要】目的：探讨检测血清miR-1273g-3p水平诊断慢性丙型肝炎（CHC）患者肝纤维化分期的效能。方法：我院诊治的57例CHC患者和同期入选的21例经体检显示为正常的健康人，采用实时荧光定量PCR法检测血清miR-1273g-3p水平。CHC患者接受长效干扰素α2b联合利巴韦林标准疗法治疗12m，并接受肝穿刺活检行组织病理学检查。结果：肝组织呈F0期、F1-2期、F3-4期患者血清miR-1273g-3p相对水平依次上升（P<0.05），研究组血清miR-1273g-3p相对水平显著高于对照组（P<0.05）；抗病毒治疗12m末不同分期研究组患者血清miR-1273g-3p水平均较治疗前显著降低（P<0.05）。结论：血清miR-1273g-3p水平随着CHC患者肝纤维化进展而逐渐升高，在抗病毒治疗后，随着肝纤维化的缓解而降低，因而具有一定的判断肝纤维化程度的效能，值得进一步研究。
【关键词】慢性丙型肝炎；肝纤维化；血清；miR-1273g-3p
随着分子生物学的发展，有关肝纤维化的研究重点逐渐转移至与纤维化发生相关的基因研究上，如MicroRNA（miRNA）是一种非编码单链RNA，长约22nt。在静息状态下，人类HSC与激活后的HSC存在miRNAs水平差异。本研究检测了慢性丙型肝炎（chronichepatitisC，CHC）患者外周血miR-1273g-3p水平变化，并分析了其与肝纤维化分期的关系，现报道如下。
1、资料和方法
1.1一般资料
2014年2月～2017年2月我科收治的CHC患者57例，男35例，女22例；年龄20～52岁，平均年龄（36.1±7.8）岁。另选择同期在我院健康体检者21例作为对照，男性15例，女性6例；平均年龄（35.2±5.6）岁。本研究所有受试者签署相关知情同意书。
1.2方法
抽取空腹外周静脉血5ml，常规检测血生化、抗-HCV和HCVRNA1.5血清miR-1273g-3p水平测定采集所有待检人员外周静脉血3ml，分离血浆，在4℃下12000r/m离心12min，吸取血清250μl，加入1.5mlEppendorf离心管，加入相关内参对照和试剂，在漩涡器上充分混匀，放置5min，使用改良的miRNA提取方法提取miRNA，并测定其纯度和浓度。测定完毕后，行逆转录合成cDNA，采用实时荧光定量PCR法检测[1]。
1.3统计学分析
将SPSS25.0作为本次数据处理软件，使用（x±s）统计研究中计量资料，并应用t实施检验；使用n统计本次研究中计数资料，并采用χ2实施检验；检验后P＜0.05均表示数据差异显著（P<0.05）。
2、结果
2.1CHC患者血清miR-1273g-3p相对水平变化
在抗病毒治疗12m末，CHCF0期、F1-2期和F3-4期患者血清miR-1273g-3p相对水平依次变化为（1.03±0.4）、（1.43±0.22）和（3.97±0.2），均显著低于治疗前（P<0.05）。
2.2血清miR-1273g-3p水平诊断肝纤维化分期的效能分析
在治疗前，分别以血清miR-1273g-3p水平>1.68和血清miR-1273g-3p水平>4.20为截断点诊断存在肝纤维化和显著肝纤维化，其ROC曲线下面积（AUC）分别为0.830，95％CI为0.714～0.973，诊断的灵敏度为72.2％，特异度为86.4％，和0.864，95％CI为0.701～0.976，诊断的灵敏度为83.6％，特异度为78.4％；在治疗后，经肝组织病理学检查发现CHC患者F0期、F1期、F2期、F3、F4期依次为15例、9例、14例、11例、8例，血清miR-1273g-3p水平诊断存在肝纤维化和显著肝纤维化的AUC分别为0.814，95％CI为0.768～0.945，诊断的灵敏度为71.4％，特异度为82.7％，和为0.853，95％CI为0.841～0.959，诊断的灵敏度为80.3％，特异度为84.2％。
3、讨论
人类miRNA家族包含1424种前体编码的1733种成熟miRNA。虽然miRNA序列数量仅占人类基因序列的1％～3％，但参与近1/3基因水平的调控，在机体生长发育、细胞分化、增殖、凋亡及肿瘤发生中发挥着重要的作用。近年来，众多研究发现miRNA在肝脏分化、形态维持和功能维护中发挥重要的作用。另有最新研究显示，miRNA分子不仅存在于细胞中，还可出现在循环中[2]。miRNA对RNA酶的降解反应稳定，可作为活跃的生物学标志物，但不同疾病血清miRNA分子水平不同，不同组织的miRNA分子具有组织特异性，故通过研究血清/血浆miRNA分子水平以评估患者病情发展将成为可能。CHC的发生主要通过输血、静脉注射、生活密切接触等方式传播，感染率约为3％，其中CHC约占感染总数的70％～85％。随着肝炎的进展，部分CHC可发展为肝硬化，甚至肝癌，因早期肝纤维化是可逆的，故临床强调早期诊断病情并予以积极治疗可促进患者康复，避免肝硬化和肝癌发生[3]。肝组织病理学活检是诊断肝纤维化的金标准，但属于有创检查，且肝组织纤维化分布不均，无法全面地评估病情发展，导致肝组织活检存在一定的局限性。
随着分子生物学研究的深入，研究发现多种慢性肝脏疾病均伴miRNA的水平差异，如药物性肝损伤、病毒性肝炎、酒精性肝病等，miRNA调控的靶基因，包括转化生长因子β1、血小板衍生生长因子、肿瘤坏死因子、血管内皮生长因子、基质金属蛋白酶抑制剂等多种细胞因子均可表现为不同。转化生长因子β/Smad可以抑制正常肝细胞的增殖，激发肝星状细胞（HSC）激活，促进ECM的生成与沉积。另一反面，转化生长因子β/Smad信号通路可导致细胞基质金属蛋白酶和金属蛋白酶组织抑制因子上调，从而导致ECM降解降低。在组织纤维化过程中，转化生长因子β/Smad信号通路的激活又可促进一些纤维化因子的活化，如血管内皮生长因子和整合素等。因此，miRNA在转化通路中发挥重要的作用。
总之，循环血miR-1273g-3p水平可有效反映肝功能损害和肝纤维化程度，监测其血清水平将有助于对肝纤维化的诊断及分期判断。
参考文献：
[1]朱传龙，朱甜甜，王坤，等.慢性丙型肝炎患者血清Pygo2水平对肝纤维化程度的评估价值探讨*[J].实用肝脏病杂志，2017，20（2）：161-164.
[2]黄祥丽.血清sFas和M30对早期诊断慢性丙型肝炎患者肝纤维化的临床意义[J].检验医学与临床，2016，13（8）：1114-1116.
[3]李华民.miR-122、miR-29b与丙型肝炎病毒相关肝细胞癌的研究[J].肝脏，2017，22（12）：1117-1120.