复健片促进缺血性卒中神经功能康复的泛脑调控机制研究

论文摘要

目的:探讨滋补肝肾中药复健片对缺血性卒中后泛脑网络功能基础——神经元—星形胶质细胞—血管内皮细胞（N-A-Ec）的影响及在神经康复中的意义。方法:以泛脑网络学说为指导,确立大脑中动脉闭塞（MCAO）大鼠脑组织N-A-Ec功能为主要研究对象。采用走横木实验评价MCAO大鼠的精细运动功能;采用激光多普勒血流仪测定局部脑组织血流量,用以反映梗死额叶皮质有效灌注血量,并间接反映神经元功能状态的变化;采用免疫组织化学方法观测GAP-43、突触素p38的表达,用以反映神经元轴突再生和突触的重建;采用免疫组织化学方法观察GFAP的表达,用以反映星形胶质细胞的活性变化,采用RT-PCR技术测定梗死灶额叶皮质P4502C11mRNA表达,间接反映星形胶质细胞分泌扩血管因子——环氧廿烷三烯酸（EETs）,调节血流量的能力;运用直线相关统计分析方法,分析GFAP与GAP-43的相关性及其P4502C11mRNA与局部脑血流量的相关性;采用原位杂交技术方法,观察血管内皮细胞内ecNOSmRNA、ET-1mRNA和P-gpmRNA的表达,反映血管内皮细胞对血管舒缩状态的调节及其参与血脑屏障形成的重要功能。结果:复健片可显著改善MCAO大鼠精细运动功能,增加脑局部血流量;增强GAP-43、突触素p38的表达,促进神经轴突的再生和突触的重建;增加GFAP的表达,增强星形胶质细胞活性,增加P4502C11mRNA表达,相关性分析表明,在复健片干预下,GFAP的表达与GAP-43的表达呈明显正相关,P4502C11mRNA表达与局部脑血流量亦呈明显正相关;抑制血管内皮细胞内病理上调的ET-1mRNA的表达,增强ecNOS、P-gp mRNA表达,而且作用随用药时间的延长而增强。结论:以滋补肝肾立法组方的复健片可在体调控MCAO大鼠脑组织神经元-星形胶质细胞-血管内皮细胞功能,从而有利于增加局部脑血流量,改善血脑屏障的功能,促进神经联系的重建。而后三者之间又可形成良性循环,共同改善缺损的神经功能。

论文目录

• 提要
• Abstract
• 引言
• 第一章 理论研究
• 第一节 缺血性卒中的神经康复机制
• 一、组织水平
• （一） 区域功能的重建代偿
• （二） 慢性半暗带的恢复
• （三） 神经机能联系不能的解除
• 二、细胞水平
• （一） 神经发生
• （二） 轴突发芽
• （三） 潜在突触的激活
• 三、分子生化水平
• （一） 神经营养因子（NTF）
• （二） 神经生长抑制因子
• 第二节 泛脑网络学说是脑功能认识的深化
• 第三节 神经元－星形胶质细胞－血管内皮细胞是泛脑网络功能的主要细胞学基础
• 第四节 缺血性卒中的中医治疗应重视滋补肝肾
• 一、肝肾阴亏是缺血性卒中的基本病因病机
• （一） 肝肾阴亏是中风病高发人群的体质特点
• （二） 肝肾阴亏贯穿中风病整个发病过程
• 二、复健片体现了中风病滋补肝肾的特色
• 三、复健片现代药理研究
• （一） 复健片组方单药药理研究
• （二） 复健片组方的现代药理研究
• 第二章 复健片促进缺血性卒中神经康复的N-A-Ec 调控机制实验研究
• 第一节 实验基本情况
• 一、实验动物
• 二、动物分组
• 三、实验仪器
• 四、实验试剂
• 五、用药方法
• 六、标本制备
• 七、统计学方法
• 第二节 缺血性卒中模型的制备
• 一、实验材料
• （一） 实验动物
• （二） 实验仪器
• （三） 实验药品及试剂
• 二、模型的制备及评价方法
• （一） 大鼠MCAO 模型的制备
• （二） 评价方法
• 三、小结
• 第三节 复健片对神经行为评分及局部脑血流量（rCBF）的影响
• 一、实验器材
• 二、实验方法
• （一） 神经行为评分法
• （二） 术前走横木训练
• （三） 梗塞侧额叶皮质rCBF 测定
• 三、实验结果
• 四、小结
• 第四节 复健片对神经元GAP-43、SYN 蛋白表达的影响
• 一、实验方法
• 二、图像分析方法
• 三、实验结果
• 四、小结
• 第五节 复健片MCAO 大鼠星形胶质细胞GFAP、P4502C11mRNA 表达的影响
• 一、实验材料及方法
• 二、实验结果
• 三、小结
• 第六节 复健片对血管内皮细胞ET-1、ecNOS、P-gp mRNA 表达的影响
• 一、实验方法
• 二、图像分析方法
• 三、实验结果
• 四、小结
• 第七节 讨论
• 一、复健片促进MCAO 大鼠运动功能康复的作用研究
• 二、复健片对N-A-Ec 的调控作用
• （一） 复健片对神经元轴突再生和突触活性的调控作用
• （二） 复健片对星形胶质细胞活性的调控作用
• （三） 复健片对血管内皮细胞功能的调控作用
• 结语
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 详细摘要