新型微生态制剂的研究及应用

论文摘要

微生态制剂是利用肠道正常微生物成员制成的调整机体微生态平衡的活的微生物制剂,它通过优势菌群、生物拮抗等作用、改善肠道微生态环境。微生态制剂能够在数量或种类上补充肠道内所缺乏的正常微生物,可以调整并维持肠道微生态平衡,增强免疫功能,促进营养物质的消化吸收,从而达到无病防病,有病治病的目的。微生态制剂在防治肠道疾病方面,不仅安全无害,无残留,不产生抗药性,还有提高饲料转化率和畜禽生产性能,改善产品品质等作用,是国内外研究的热点。本研究依据微生态学原理,研制开发了以拟杆菌、乳酸菌、枯草芽孢杆菌和酵母菌复合的微生物菌液能有效防治仔猪肠道疾病,提高生产性能。本实验直接从健康的仔猪肠道中取样,采用选择行培养基:AN培养基、BDS培养基、MRS培养基用以筛选拟杆菌、乳酸菌。对于乳酸菌、拟杆菌的鉴定采用了传统的形态观察、革兰氏染色、生理生化实验,糖发酵实验以及现代的16Sr-DNA分子鉴定法,对于两株菌的筛选则是模拟了宿主体内低pH值、高胆盐浓度的环境,筛选出了具有较强抗逆性的菌株。此外还在体外环境下筛选出对致病性大肠杆菌O45具有较高抑菌活性的乳酸菌。活菌数量的多少是微生态制剂品质优劣的关键,发酵实验围绕如何获得最大活菌数进行了系统的研究。实验主要从最适培养基的筛选与优化、最适培养条件的优化、发酵生产工艺的优化这几个方面进行研究,确立了酵母菌、枯草芽孢杆菌的最适培养基、最适培养条件和发酵条件、发酵周期。由于啤酒酵母和枯草芽孢杆菌的差异,我们分别采用分批发酵工艺和补料分批发酵工艺都获得了很好的结果,尤其是枯草芽孢杆菌采用补料分批发酵后活菌数和芽孢数都成倍增加。研究确立了乳酸菌、拟杆菌的最适培养基、最适培养条件。微生态制剂的安全性实验采用霍恩氏法,实验结果表明,该复合微生态制剂样品经口急性毒性LD50>10000mg/Kg.bw。根据急性经口毒性分级标准,该复合微生态制剂样品属实际无毒物质。动物饲喂实验表明,每天给仔猪灌喂浓度为1010cfu/mL的复合菌液2mL能显著提高仔猪增重,35日龄时实验组仔猪增重比对照组提高了20%,差异极显著（P<0.01）;有效提高仔猪成活率,在整个实验期,实验组成活率为95.7%,而对照组仅为72.91%,提高成活率22.79%,差异显著（P<0.05）;复合微生物菌液对预防哺乳仔猪腹泻效果明显,对照组发病率为39.1%,实验组发病率为17.4%,发病率降低了21.7%,差异显著（P<0.05）。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 引言
• 文献综述
• 1 微生态学的理论研究
• 1.1 微生态学的提出及其基础理论
• 1.2 微生态制剂的作用机理
• 1.3 消化道微生态系统
• 2 国内外微生态制剂的应用情况
• 3 微生态制剂在仔猪生产中的应用
• 3.1 早期断奶仔猪的特点
• 3.2 微生态制剂在仔猪生产中的应用效果
• 4 拟杆菌的研究现状
• 4.1 拟杆菌对肠道微生态平衡的影响
• 4.2 拟杆菌的益生作用
• 4.3 拟杆菌的作用机理
• 5 影响微生态制剂作用效果的因素
• 5.1 菌种本身的特性是发挥其效能的关键因素
• 5.2 宿主因素对微生态制剂性能的影响
• 5.3 生产条件及产品剂型对微生态制剂性能的影响
• 5.4 使用方法、使用剂量缺乏评价标准等因素对微生态制剂性能的影响
• 6 微生态制剂在研究开发过程中存在的问题及解决方法
• 6.1 微生态制剂存在的问题
• 6.2 改进措施
• 7 微生态制剂的研究前景及本研究的目的意义
• 第一章 拟杆菌、乳酸菌的分离、筛选、鉴定
• 一 拟杆菌的分离、筛选、鉴定实验
• 1 材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 培养基及稀释液配方
• 1.3 生化试剂
• 1.4 主要仪器
• 2 方法
• 2.1 拟杆菌的分离
• 2.2 拟杆菌的筛选
• 2.3 拟杆菌的鉴定实验
• 2.4 拟杆菌的生理特性实验
• 2.5 16Sr DNA 法鉴定拟杆菌
• 3 结果与分析
• 3.1 菌株的革兰氏染色结果
• 3.2 三糖铁琼脂培养基穿刺实验结果
• 3.3 生理生化试验及糖发酵实验结果
• 3.4 拟杆菌耐受性实验结果
• 3.5 16Sr DNA 法鉴定结果
• 二 乳酸菌的分离、筛选、鉴定实验
• 1 材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 培养基及稀释液配方
• 1.3 生化培养基
• 1.4 生化试剂
• 1.5 主要仪器
• 2 方法
• 2.1 乳酸菌的分离
• 2.2 乳酸菌的筛选
• 2.3 抑菌实验
• 2.4 乳酸菌鉴定的生理生化鉴定实验
• 2.5 菌株的耐酸、耐胆盐筛选实验
• 3 结果与分析
• 3.1 乳酸菌的分离和菌落形态观察
• 3.2 抑菌实验及菌种生理生化鉴定的结果
• 3.3 耐酸实验结果
• 3.4 耐胆盐实验结果
• 4 小结
• 第二章 酵母菌、枯草芽孢杆菌、乳酸菌和拟杆菌的发酵条件研究
• 1 酵母菌发酵条件研究
• 1.1 材料
• 1.1.1 菌种
• 1.1.2 培养基
• 1.1.3 主要试剂
• 1.1.4 主要仪器
• 1.2 方法
• 1.2.1 酵母菌种子培养基的优化
• 1.2.2 酵母菌的发酵培养
• 1.2.3 还原糖标准曲线的绘制
• 1.2.4 发酵液中还原糖的测定
• 1.2.5 活菌数测定
• 1.3 结果与分析
• 1.3.1 种子培养基优化结果
• 1.3.2 酵母菌分批发酵实验结果
• 2 枯草芽孢杆菌发酵条件的研究
• 2.1 材料
• 2.1.1 菌种
• 2.1.2 主要试剂
• 2.1.3 主要仪器
• 2.1.4 培养基
• 2.2 方法
• 2.2.1 枯草芽孢杆菌生长曲线的测定
• 2.2.2 枯草芽孢杆菌摇瓶发酵培养基的筛选
• 2.2.3 枯草芽孢杆菌摇瓶培养条件的确定
• 2.2.4 枯草芽孢杆菌发酵工艺的确定
• 2.3 结果
• 2.3.1 枯草芽孢杆菌生长曲线测定结果
• 2.3.2 培养基筛选的结果
• 2.3.3 均匀设计优化摇瓶培养条件结果
• 2.3.4 20L 发酵罐发酵工艺结果
• 3 乳酸菌发酵条件研究
• 3.1 材料
• 3.1.1 菌种
• 3.1.2 培养基
• 3.1.3 主要仪器设备
• 3.2 方法
• 3.2.1 活菌数的测定
• 3.2.2 培养基的筛选
• 3.2.3 培养基配方的优化
• 3.2.4 发酵过程参数的测定
• 3.3 结果
• 3.3.1 培养基筛选结果
• 3.3.2 培养基配方的优化结果
• 3.3.3 发酵过程参数测定结果
• 4 拟杆菌发酵条件的研究
• 4.1 材料
• 4.1.1 菌种
• 4.1.2 培养基
• 4.1.3 主要试剂
• 4.1.4 主要仪器
• 4.2 方法
• 4.2.1 最适培养基的筛选
• 4.2.2 最适培养基的优化
• 4.2.3 发酵条件的优化
• 4.2.4 发酵过程参数的测定
• 4.3 结果
• 4.3.1 最适培养基筛选结果
• 4.3.2 培养基的优化结果
• 4.3.3 发酵培养条件的优化结果
• 4.3.4 拟杆菌发酵曲线
• 5 小结
• 第三章 安全性实验
• 1 实验材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 复合活菌制剂的制备
• 2 实验方法
• 3 实验结果
• 4 结论
• 第四章 动物饲喂实验
• 1 材料
• 1.1 实验制剂
• 1.2 实验动物
• 2 方法
• 2.1 实验分组
• 2.2 攻毒试验
• 2.3 仔猪测重程序
• 2.4 仔猪下痢后的应对办法
• 3 实验结果
• 3.1 复合微生物菌液对仔猪增重的影响
• 3.2 复合微生物菌液对仔猪成活率的影响
• 3.3 复合微生物菌液对仔猪腹泻防治效果的影响
• 3.4 攻毒实验结果
• 4 小结
• 第五章 结果与讨论
• 1 结果
• 2 讨论
• 参考文献
• 个人简介
• 致谢
• 专利申请受理通知书
• 发明专利请求书