论文摘要
背景：线粒体DNA（mitochodrial DNA，mtDNA）作为核外唯一的遗传物质，因缺乏组蛋白保护，且损伤修复系统不完善，容易成为致癌物质攻击的靶子，现已研究发现其与多种疾病和多种肿瘤的发生、发展有关。mtDNA cyt-b基因编码的是氧化磷酸化呼吸链中的复合体Ⅲ（泛醌-细胞色素C还原酶）中的一个亚基，基因进化速度适中，比较稳定。近年来许多与疾病有关的mtDNA的相关基因的表达，以及线粒体DNA特异性突变在线粒体基因稳定区域的不断被发现，为疾病的诊断和研究提供了可靠的依据。血管内皮生长因子（VEGF）在乳腺癌发生和发展中发挥着重要的作用，现在也已经成为肿瘤研究领域研究的热点。目的：1)检测线粒体DNA的拷贝量在乳腺癌中的变化；2)检测mtDNA Cyt-b基因和血管内皮生长因子（VEGF）的mRNA在乳腺癌中表达；3)检测VEGF蛋白和MVD；4)探讨它们在乳腺癌发生、发展中的作用和关系。方法：1)采用聚合酶链反应（PCR），分别扩增乳腺癌组织20例，癌旁正常组织20例的线粒体D-loop区的HV1和HV2区，并以核基因组的β-actin作为定量标准物；利用聚丙烯酰胺凝胶电泳法比较两者mtDNA拷贝量的差异；2)采用逆转录-聚合酶链反应（Reversed-transcription PCR，RT-PCR），分别对乳腺癌标本19例，癌旁组织19例的mtDNA Cyt-b和VEGF的mRNA表达进行检测，并以核基因组的β-actin作为定量标准物，比较两种基因在乳腺癌组织和癌旁组织中的表达的差异；3)采用S-P免疫组织化学法，对42例乳腺癌组织，30例癌旁组织的VEGF蛋白和CD34蛋白进行检测，比较它们在乳腺癌和癌旁组织中的差异。结果：1)mtDNAHV1和HV2的拷贝量（以β-actin作内参），在乳腺癌组织中HV10.864±0.219、HV20.884±0.237，低于癌旁组织HV11.353±0.817、HV22.471±0.168，在两者中比较有差异（P＜0.05和P＜0.01），并且HV2更为显著；2)mtDNA Cyt-b和VEGF的mRNA表达，在乳腺癌组织中Cyt-b 0.843±0.147、VEGF 1.264±0.395，均高于癌旁组织Cyt-b 0.284±0.118、VEGF 0.725±0.212，在两者中比较都有显著性差异（P＜0.01），并且mtDNA Cyt-b和VEGF的mRNA表达呈正相关（P＜0.01）；3)VEGF蛋白在乳腺癌组织中的表达率为73.8％（31／42），在癌旁组织中的表达率10％（3／30），两者比较有显著性差异（P＜0.01），其中VEGF蛋白的表达与VEGF的mRNA表达呈正相关性（P＜0.01）；微血管密度MVD在VEGF高表达组65.300±20.023，在VEGF低表达组36.440±18.450，两者比较有显著性差异（P＜0.01），并且MVD与VEGF的mRNA和蛋白的表达均呈正相关性（均为P＜0.01）。结论：1)乳腺癌组织中mtDNA拷贝量低于癌旁组织，可用于乳腺癌的早期诊断；2)乳腺癌组织中mtDNA Cyt-b的的mRNA表达高于癌旁组织，可成为一种新的乳腺癌标志物；3)乳腺癌组织中VEGF的mRNA及其蛋白的表达高于癌旁组织：4)乳腺癌中mtDNA Cyt-b的表达与VEGF的表达呈正相关关系，推测两者之间有一定的信号表达；5)乳腺癌中VEGF蛋白的表达与VEGF mRNA的表达呈正相关关系；6)微血管密度MVD与VEGF的mRNA和VEGF蛋白的表达呈正相关关系，两者可作为乳腺癌预后的客观指标，也可作为血管抑制剂的靶点。
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标签：乳腺癌论文; 线粒体论文; 细胞色素论文; 血管内皮生长因子论文; 拷贝量论文;