依托咪酯诱发HL-60细胞凋亡以及预处理对其的抑制作用

论文摘要

目的:细胞凋亡存在于多种生理病理过程,对于细胞凋亡的研究可阐明疾病的发生机制,探索疾病新的治疗方法和手段。依托咪酯作为一种静脉麻醉药,对血流动力学影响小,且具有一定的神经保护作用。但是依托咪酯具有降低皮质醇的作用,因此它的使用受到了一定的关注。实验证实依托咪酯直接抑制11-β-羟化酶（一种合成皮质醇必需的酶）的活性,诱导剂量（0.3mg/kg）的依托咪酯产生的肾上腺抑制作用可达5-8小时。皮质醇的血浆浓度降低自然影响下丘脑—垂体—肾上腺轴的调节功能,影响机体对应激的反应,对免疫系统产生间接的抑制作用。另有实验发现依托咪酯可以通过抑制T-淋巴细胞增殖及粒细胞功能,直接影响免疫系统。因此,我们从细胞凋亡的角度,探索依托咪酯的副作用,具有药理学意义和临床意义。人急性髓性细胞白血病细胞（HL-60细胞）保持着中性粒细胞和单核细胞的某些免疫特征,而且该细胞株是用于凋亡研究的典型标准株,其凋亡的多种生化反应步骤已得到确立。观察依托咪酯对HL-60细胞的作用,既可以反映依托咪酯对免疫细胞的直接作用,又有利于研究其具体的凋亡机制。此外,本研究用小剂量的依托咪酯预处理HL-60细胞,观察此方法是否对HL-60细胞凋亡具有抑制作用,以便寻找降低依托咪酯副作用的新途径。方法:正常培养HL-60细胞,浓度调节至1.5×105 /ml,按照不同的处理方法进行分组:1.对照组:仅在无依托咪酯的正常培养基中培养24h;2.预处理组:用含1μM依托咪酯的培养基预处理1h,洗去依托咪酯后在培养基中恢复4h,再用含500μM依托咪酯的培养基刺激24h;3.损伤组:仅用含500μM依托咪酯的培养基刺激24h。收集细胞后,分别用MTT法检测细胞活性,AnnexinⅤ-PI双染流式细胞法检测细胞凋亡,Western Blot法检测caspase-3,8,9的活化。结果:1.MTT实验结果表明,与对照组相比,预处理组和损伤组的细胞生存率均有下降;但与损伤组相比,预处理组的细胞生存率增高35.35%,具有显著性差异,P < 0.01。2.AnnexinⅤ-PI双染流式细胞的实验结果显示,与对照组相比,预处理组和损伤组的早期凋亡率和死亡率（1-活细胞率）有所升高;而与损伤组相比,预处理组的早期凋亡率和死亡率分别降低27.48%和20.23%,有显著性差异,P< 0.01。3.Western Blot实验结果显示,与对照组相比,依托咪酯刺激后,procaspase-3发生活化,表达减少,而caspase-8、9活化片段的表达增多;但是预处理组比损伤组的procaspase-3表达增多,caspase-8、9活化片段的表达减少,此差异具有统计学意义,P < 0.01。结论:1.依托咪酯能够直接抑制HL-60细胞活性;2.依托咪酯可以诱发HL-60细胞凋亡,其机制可能依赖caspases,并通过内、外源两条凋亡途径;3.小剂量依托咪酯预处理可抑制其诱发的HL-60细胞凋亡,并且不受凋亡途径的影响。

论文目录

• 一、正文
• （一） 中文摘要
• （二） 英文摘要
• （三） 前言
• （四） 材料与方法
• （五） 结果
• （六） 讨论
• （七） 结论
• （八） 参考文献
• 二、文献综述
• （一） 综述
• （二） 参考文献
• 三、致谢