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非酒精性脂肪性肝病大鼠肝内蛋白激酶B表达的变化及N-乙酰半胱氨酸、褪黑素干预的研究

2020-12-03阅读(703)

非酒精性脂肪性肝病大鼠肝内蛋白激酶B表达的变化及N-乙酰半胱氨酸、褪黑素干预的研究

论文摘要

目的建立非酒精性脂肪性肝病模型,观察非酒精性脂肪性肝病大鼠血清转氨酶、血糖,肝内脂质,SOD、MDA、GSH-PX以及肝脏形态学、肝内PKB、P-PKB表达的变化以及N-乙酰半胱氨酸（NAC）、褪黑素（MT）对上述指标的影响。方法1.（NAC部分）80只雄性Wistar大鼠随机分成5组每组16只:正常对照组予普通饲料饮食、模型组和NAC低、中、高3个剂量组予高脂饲料饮食10周。各NAC组分别给予NAC10 mg/（kg·d）、20 mg/（kg·d）、40 mg/（kg·d）,正常组和模型组分别给予等量的生理盐水,每日一次定时灌胃。10周后处死,处死前各组随机选取半数大鼠门静脉注射胰岛素,剂量为2.5U。称肝湿重并计算肝指数,观察肝脏病理形态学改变,生化法检测大鼠血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、血糖（GLU）,肝匀浆TC、TG,超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽—过氧化物酶（GSH—PX）、免疫组化法测定肝脏蛋白激酶B、磷酸化蛋白激酶B（PKB、P-PKB）的表达以及P-PKB/PKB比值。2.（MT部分）分组、给药及标本收集来源前期研究,具体方法:将50只雄性Wistar大鼠随机分成5组每组10只:正常对照组给予普通饮食、模型组和低、中、高3个剂量褪黑素组给予高脂饮食。褪黑素组分别给予褪黑素2.5 mg/（kg·d）、5.0mg/（kg·d）和10.0 mg/（kg·d）剂量,正常组和模型组每日一次给予等量的生理盐水（内含1%无水乙醇）腹腔注射。12周后处死,检测指标同NAC部分。结果1.（NAC部分）10周高脂饮食成功复制大鼠NAFL/NASH模型。与正常对照组比较,模型组大鼠肝湿重及肝指数增加（P＜0.05）,肝细胞呈明显脂肪变性,肝小叶内见炎性细胞浸润和点状坏死,炎症积分明显升高（P＜0.01）;血清ALT、AST、TC、GLU以及肝匀浆TC、TG、MDA值升高（P＜0.05）,肝匀浆SOD、GSH-PX值降低（P＜0.05）。未注射胰岛素和注射胰岛素的模型组肝内PKB、P-PKB表达及P-PKB/PKB比值均分别低于未注射胰岛素和注射胰岛素的正常组（P＜0.05）。胰岛素注射正常组PKB、P-PKB表达及P-PKB/PKB比值分别较非胰岛素注射正常组明显升高（P＜0.05）。胰岛素注射模型组PKB、P-PKB表达及P-PKB/PKB比值分别为较非胰岛素注射模型组升高,但差异无显著性（P＞0.05）。与模型组比较,NAC中高剂量组肝湿重、肝匀浆MDA值降低,肝匀浆SOD,GSH-PX水平升高（P＜0.05）;NAC高剂量组肝指数、血清AST、血GLU、肝匀浆TC,TG降低（P＜0.05）。未注射胰岛素和注射胰岛素的NAC中、高剂量组大鼠组肝内PKB、P-PKB表达及P-PKB/PKB比值均分别高于未注射胰岛素和注射胰岛素的模型组（P＜0.05）。胰岛素注射的NAC中、高剂量组PKB、P-PKB表达及P-PKB/PKB比值分别较非胰岛素注射的NAC中、高剂量组明显升高（P＜0.05）。2.（MT部分）与正常对照组比较,模型组大鼠肝湿重及肝指数明显增高（P＜0.01）;肝细胞呈脂肪变性,肝小叶内见灶性炎细胞浸润和点状坏死,炎症积分明显升高（P＜0.01）,血清ALT、血GLU（P＜0.05）,AST,TC值（P＜0.01）以及肝匀浆TC、TG、MDA值明显升高（P＜0.05）;肝匀浆SOD、GSH-PX水平明显降低（P＜0.05）;肝脏PKB、P-PKB表达,P-PKB/PKB比值明显下降（P＜0.05）。与模型组相比,MT中、高剂量组肝湿重及肝指数（P＜0.05,P＜0.01）,MT高剂量组血清AST降低（P＜0.05）。MT中、高剂量组肝脏TC和高剂量组TG低于模型组（P＜0.05,P＜0.01。P＜0.05）;肝细胞脂肪变性、肝小叶内炎症细胞浸润明显减轻（P＜0.01）。肝匀浆SOD、GSH-PX水平升高、MDA值降低（P＜0.01）。MT中、高剂量组PKB、P-PKB表达及高剂量组P-PKB/PKB值升高（P＜0.05）。结论NAFL/NASH大鼠肝组织PKB、P-PKB的表达以及P-PKB/PKB比值下降,对胰岛素的敏感性下降,提示NAFL/NASH大鼠肝内存在胰岛素抵抗和PKB表达异常。NAC、MT可降低NAFL/NASH大鼠血清AST水平、血GLU、TC,减少肝内脂质沉积以及改善肝脏病理学变化,对NAFL/NASH具有保护作用,这种作用可能与抗氧化应激和上调肝内PKB表达或/和改善肝内胰岛素抵抗有关。

论文目录

  • 英文缩略词表
  • 摘要
  • Abstract
  • 1 前言
  • 2 材料与方法
  • 2.1 材料
  • 2.1.1 动物
  • 2.1.2 主要试剂
  • 2.1.3 主要仪器、设备
  • 2.2 实验方法
  • 2.2.1 NAC对大鼠非酒精性脂肪肝性肝病的影响的研究
  • 2.2.2 MT对大鼠非酒精性脂肪肝性肝病的影响的研究
  • 2.2.3 大鼠血清生化检测
  • 2.2.4 肝匀浆SOD,GSH-PX活力和MDA含量的测定方法
  • 2.2.5 肝组织病理结果评分
  • 2.2.6 PKB、P-PKB的免疫组化染色方法
  • 2.2.7 免疫组化结果判断
  • 2.3 数据处理和统计分析
  • 3 结果
  • 3.1 大鼠NAFL/NASH模型的建立
  • 3.1.1 NAC干预研究部分
  • 3.1.2 MT干预研究部分（生化和病理学检查结果系前期研究结果）
  • 3.2 NAC、MT对NAFL/NASH大鼠的干预研究
  • 3.2.1 NAC对NAPL/NASH大鼠的干预研究
  • 3.2.2 MT对NAFL/NASH大鼠的干预研究
  • 4 讨论
  • 4.1 NAFL/NASH模型的建立
  • 4.2 大鼠NAFL/NASH肝匀浆中SOD、GSH-PX、MDA水平变化
  • 4.3 大鼠NAFL/NASH血糖、肝脏PKB、P-PKB的表达以及P-PKB/PKB比值的变化
  • 4.4 NAC和MT对NAFL/NASH形成中的干预作用
  • 4.4.1 NAC、MT对NAFL/NASH大鼠转氨酶,脂质以及肝脏病理的影响。
  • 4.4.2 NAC、MT对NAFL/NASH大鼠肝脏SOD、GSH-PX、MDA含量的影响。
  • 4.4.3 NAC、MT对NAFL/NASH大鼠血GLU水平及肝脏PKB、P-PKB的表达、P-PKB/PKB比值的影响
  • 5 结论
  • 参考文献
  • 个人简历
  • 致谢
  • 综述 非酒精性脂肪性肝炎的药物治疗
  • 附图

    • 相关论文文献

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