水疱性口炎病毒反向遗传重组载体的构建

论文摘要

随着RNA病毒反向遗传技术的进展,水疱性口炎病毒（vesivular stomatitisvirus,VSV）载体已被开发成为一种有效的治疗制剂。VSV病毒载体是一种高效的溶瘤病毒载体,具有非常广的溶瘤范围。资料报道VSV载体几乎能够溶解所有的瘤细胞,在体外实验中VSV载体的溶瘤率都在50%以上,在体内实验中VSV载体能够显著延长荷瘤动物模型的寿命。VSV载体也被开发成为一种有效的疫苗载体, VSV作为疫苗载体应用到获得性免疫综合症病毒、流感病毒、丙型肝炎病毒和乙肝病毒等疫苗的研制过程中。因此水疱性口炎病毒载体具有非常好的应用前景。本实验克隆了水疱性口炎病毒的全长cDNA序列（11161bp）以及L蛋白基因序列（6330bp）、N蛋白基因序列（1269bp）和P蛋白基因序列（798bp）,并构建了水疱性口炎病毒的反向遗传重组系统,即:包含VSV全长cDNA序列的反向遗传重组载体和L蛋白、N蛋白和P蛋白的表达载体,并将这四种质粒共同转染BHK-21细胞,对VSV的反向遗传重组进行探索。这为水疱性口炎病毒载体的进一步应用打下基础。

论文目录

• 前言
• 第一篇 文献综述
• 第一章 非逆转录 RNA 病毒的反向遗传操作技术研究进展
• 1 RNA 病毒反向遗传操作技术的定义
• 2 RNA 病毒反向遗传的策略
• 3 几种常见 RNA 病毒的反向重组遗传进展
• 4 影响 RNA 病毒反向遗传重组的因素
• 5 RNA病毒反向遗传重组的应用前景
• 6 RNA 病毒反向遗传重组的潜在危害性
• 第二章水疱性口炎病毒疫苗载体的研究进展
• 1 水疱性口炎病毒的流行病学
• 2 水疱性口炎的基因组特点
• 3 水疱性口炎病毒的感染过程
• 4 水疱性口炎病毒的反向遗传操作技术
• 5 水疱性口炎病毒载体作为疫苗载体的优点
• 6 水疱性口炎病毒载体的概述
• 7 水疱性口炎病毒作为疫苗载体的应用
• 第三章水疱性口炎病毒溶瘤载体的研究进展
• 1 水疱性口炎病毒的溶瘤机制
• 2 水疱性口炎病毒作为溶瘤病毒的优点
• 3 水疱性口炎病毒作为溶瘤病毒的研究进展
• 第二篇 研究内容
• 实验一 水疱性口炎病毒全长cDNA、L蛋白基因、N蛋白基因和P蛋白基因的克隆及测序
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 实验二 包含水疱性口炎病毒全长cDNA 的反向遗传重组载体的构建
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 实验三 PVAX1-L、 PVAX1-N 和PVAX1-P 载体的构建及其在BHK-21 细胞中的瞬时表达
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 实验四 水疱性口炎病毒反向遗传重组的初步探索
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 结论
• 参考文献
• 中文摘要
• 英文摘要
• 致谢