再生障碍性贫血患者血清对脐血CD34+细胞凋亡及其pAkt表达的影响

论文摘要

目的:比较不同方法分离脐血CD34+细胞的效果,并观察再生障碍性贫血患者血清对脐血CD34+细胞凋亡及其pAkt表达的影响。方法:1.采集脐血48份,室温（RT）下保存12、24、48小时,分别用密度离心法和羟乙基淀粉（HES）沉淀法分离脐血单个核细胞（MNC）,再用免疫磁珠法纯化CD34+细胞,然后分别对分离前、后CD34+细胞进行计数和台朌蓝染色。2.将收集的CD34+细胞随机分为三组,分别加入正常人、非重型再生障碍性贫血（NSAA）患者和重型再生障碍性贫血（SAA）患者血清培养24小时。3.对各组培养后的CD34+细胞分别进行细胞计数、台盼蓝染色测细胞存活率。4.流式细胞仪检测各组培养后的CD34+细胞的凋亡率。5.细胞免疫化学法测各组培养后的CD34+细胞的pAkt蛋白表达。结果:1.脐血RT下保存48小时CD34+细胞回收率最高,其次为12小时,24小时回收率最低（P<0.01）。HES沉淀法的CD34+细胞回收率均明显高于密度离心法（P<0.01）。各组间细胞存活率差异无统计学意义（P>0.05）。2.培养24小时,SAA组CD34+细胞浓度和细胞存活率最低,其次为NSAA组,正常对照组的CD34+细胞浓度和细胞存活率最高（P<0.01）。3.培养24小时,SAA组的细胞凋亡率最高,其次为NSAA组,正常对照组的细胞凋亡率最低（P<0.01）。4.培养24小时,细胞免疫化学结果显示,SAA组的pAkt蛋白水平最低,其次为NSAA组,正常对照组的pAkt蛋白水平最高（P<0.01）。5.经同一份血清作用24小时的CD34+细胞凋亡率与细胞内pAkt水平相关性分析显示呈负相关性（r=-0.969,P<0.05）。结论:1. HES沉淀法优于密度离心法,且以RT下保存48小时分离为优。2.再生障碍性贫血患者血清体外可诱导CD34+细胞凋亡,且SAA患者血清作用明显强于NSAA患者血清。3.再生障碍性贫血患者血清可以下调CD34+细胞pAkt水平,且SAA患者血清作用明显强于NSAA患者血清。4. pAkt可能参与再生障碍性贫血患者血清诱导CD34+细胞凋亡过程。

论文目录

• 英文缩略词表（Abbreviation）
• 中文摘要（Abstract in Chinese）
• 英文摘要（Abstract in English）
• +细胞分离方法比较'>第一部分 脐血CD34⁺细胞分离方法比较
• 前言（Introduction）
• 材料和方法（Material and Method）
• 结果（Results）
• 讨论（Discussion）
• 结论（Conclusion）
• 参考文献（一）（References ）
• +细胞凋亡及其pAkt 影响'>第二部分 再障患者血清对脐血CD34⁺细胞凋亡及其pAkt 影响
• 前言（Introduction）
• 材料和方法（Material and Method）
• 结果（Results）
• 讨论（Discussion）
• 结论（Conclusion）
• 参考文献（二）（References）
• 综述（Review）
• 综述参考文献（References）
• 致谢（Acknowledgements）