论文摘要
反义寡聚核甘酸（AODN）是一段与mRNA或DNA特异性结合并阻断其基因表达的人工合成的DNA分子。根据碱基互补原理,反义寡聚核甘酸可以把DNA双螺旋分子的专一性序列作为靶目标,形成三螺旋DNA从转录水平或转录延伸水平完全抑制特定基因的表达。目前反义寡聚核甘酸技术在肿瘤治疗的研究中已成为热点之一,并且已取得了一些成绩。人的Elongator复合物在组成及其与RNAPⅡ的作用方式上与酵母的Elongator复合物十分相似,在以前的研究中,我们利用酵母的功能补偿系统研究了人Elongator复合物中的hELP3亚基的功能,但在人细胞中对其功能研究极少。为了研究人细胞中hELP3在调控基因转录中的作用,我们利用hELP3反义寡核苷酸下调人293T细胞中hELP3的表达。实验结果表明hELP3蛋白质水平的下降明显抑制了hsp70-2基因的表达,同时这一现象伴随着hsp70-2基因上组蛋白H3的乙酰化不足和RNA聚合酶Ⅱ密度降低。而且我们通过ChIP实验检测hELP3被招募到hsp70-2基因上,这一结果进一步证明hELP3对于hsp70-2的调控作用是直接的。本文提供了hELP3在人细胞中调控hsp70-2基因转录延伸的直接证据,为进一步揭示人Elongator复合物的功能及作用机制提供实验证据。
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中文摘要英文摘要引言一、本论文的研究背景和立题依据二、本论文的研究内容和意义第一章 文献综述一、RNA 干涉研究进展（一） RNA 干涉的发现（二） RNA 干涉的机制（三） RNA 干涉的特点（四） RNA 干涉的生物学意义二、反义寡聚核甘酸的研究进展（一） 反义寡聚核甘酸的发现（二） 反义寡聚核甘酸的来源（三） 反义寡聚核甘酸的作用机理（四） 反义寡聚核甘酸的应用三、Elongator 的研究进展（一） 酵母 Elongator 复合物（二） 人的 Elongator 复合物四、热休克蛋白的生物学功能及其表达调控（一） 热休克蛋白的发现，分类及生物学功能（二） 热休克蛋白的表达调控（三） Hsp70 家族（四） 热休克蛋白的研究展望第二章 实验材料和方法一、实验材料（一） 细胞培养及其培养试剂（二） 细胞转染及体外 RNA 转录试剂（三） RT-PCR 相关试剂（四） 实验设备及仪器二、实验方法（一） 选择siRNAs 序列（二） PCR 获得体外转录模板（三） 体外转录获得dsRNA（四） Shortcut RNase III 酶切dsRNA 获得siRNAs（五） 反义寡核甘酸的合成（六） 293T 细胞培养及siRNAs 或寡核甘酸转染细胞（七） 哺乳动物细胞总 RNA 的提取（八） 逆转录 PCR （RT-PCR）（九） SDS-PAGE 电泳及 Western Blotting（十） 酶联免疫吸附实验（十一） 染色质免疫沉淀实验（十二） PCR 和荧光适时定量 Realtime PCR第三章 结果与分析一、应用 RNase III 酶切dsRNA 方法引发 RNAi（一） 获得siRNA 混合片段（二） RNAi 抑制hELP3 基因表达的 RT－PCR 结果分析二、应用反义寡核甘酸（一） 利用反义寡核苷酸抑制hELP3 mRNA 和蛋白水平的表达（二） 细胞内hElp3 水平的降低可抑制hsp70-2 的表达（三） hElp3 被招募到hsp70-2 基因上（四） hElp3 影响hsp70-2 上组蛋白 H3 的乙酰化（五） hElp3 影响 RNAPII 在hsp70-2 上的延伸第四章 讨论一、siRNA 干涉方法失败的原因二、选择设计合适的反义寡聚核甘酸片段三、hsp70-2 基因上转录通过染色质模板的机制四、hElp3 调控hsp70-2 基因转录的机制第五章 结论参考文献致谢在学期间公开发表论文及著作情况
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标签：反义寡核甘酸论文; 乙酰化论文; 基因论文;
人Elongator复合物Elp3亚基调控人hsp70-2基因的转录
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