论文摘要
目的：应用RNAi（RNA interference）技术探讨靶向主要组织相容性复合物（MHC）Ⅱ类抗原反式转录激活因子（MHC-Ⅱtransactivator，CⅡTA）的shRNA质粒载体抑制大鼠骨髓源树突状细胞（DC）表面MHC-Ⅱ类抗原表达的可行性。方法：采用培养基选择方法体外培养大鼠骨髓源DC；流式细胞仪检测DC表面抗原MHC-Ⅱ、OX-62表达情况；经体外设计合成针对CⅡTA mRNA序列特异性CⅡTA skRNA3条，并分别构建于Pgenesil-1质粒，提取重组质粒进行酶切鉴定并测序；在阳离子脂质体介导下转染DC；荧光实时定量PCR检测转染后CⅡTA、MHC-ⅡmRNA表达水平的变化，流式细胞仪检测细胞表面抗原MHC-Ⅱ表达水平的变化；使用SPSS 13.0 for Windows进行数据分析。结果：经体外培养，每只大鼠可获得1.0×107个DC；经测序结果分析，pCⅡTA1-shRNA、pCⅡTA2-shRNA、pCⅡTA3-shRNA均为插入正确的克隆质粒；荧光实时定量PCR检测显示构建的3个pCⅡTA-shRNA质粒通过脂质体转染大鼠骨髓源DC，均能不同程度地抑制CⅡTA和MHC-Ⅱ的表达，与对照组具有显著差异（P＜0.01），其中pCⅡTA1-shRNA质粒组的抑制作用最为明显，对CⅡTA、MHC-ⅡmRNA抑制率分别为89.25±3.31％、84.75±5.73％，空白对照组、Lipofectamine组与pHK-shRNA质粒对照组间CⅡTA、MHC-Ⅱ的mRNA转录水平无显著性差异（P＞0.5）；流式细胞仪检测显示3个CⅡTA-shRNA质粒组中DC转染后MHC-Ⅱ的抗原水平均较对照组明显降低（p＜0.01），与对照组有显著性差异，其中pCⅡTA1-shRNA质粒组中MHC-Ⅱ的抗原表达率为15.25±5.73％，低于其它两个CⅡTA-shRNA质粒组，空白对照组、Lipofectamine组与pHK-shRNA质粒对照组间MHC-Ⅱ的的抗原表达率无显著性差异（P＞0.05）；经Spearman等级相关分析，DC转染后MHC-Ⅱ的mRNA转录水平与CⅡTA的mRNA转录水平具有显著相关性（rs=0.776，p＜0.01）；经Spearman等级相关分析，DC转染后MHC-Ⅱ的抗原表达水平与MHC-Ⅱ和CⅡTA的mRNA转录水平均具有显著相关性（MHC-Ⅱ：rs=0.755，p＜0.01；CⅡTA：rs=0.873，p＜0.01）。结论：培养基选择法可收获大量骨髓源DC，形态典型，高表达MHC-Ⅱ和OX-62分子；脂质体Lipofectamine 2000介导CⅡTA shRNA质粒载体转染大鼠骨髓DC，转染效率较高，可高效、特异地抑制自身的表达，并抑制了其调控的MHC-Ⅱ的相应表达；CⅡTA shRNA质粒载体对MHC-Ⅱ基因表达水平的抑制程度低于对CⅡTA基因的抑制；利用CⅡTA shRNA质粒载体沉默CⅡTA基因从而下调MHC-Ⅱ的表达的策略是可行的。从而为进一步研究利用RNAi技术抑制MHC-Ⅱ的表达降低移植排斥反应提供了实验依据。
论文目录
相关论文文献
- [1].内源性MHCⅠ类分子对海马神经元突起生长的影响[J]. 生物学杂志 2020(02)
- [2].嗜水气单胞菌胁迫下东北林蛙MHCⅠ基因在不同组织的表达[J]. 生物工程学报 2020(07)
- [3].卵形鲳鲹MHCⅡβ基因的克隆与表达分析[J]. 南方水产科学 2017(04)
- [4].人类MHCⅡ、Ⅲ区域精神分裂症相关基因的遗传学分析[J]. 世界最新医学信息文摘 2017(71)
- [5].鸡主要组织相容性复合体(MHC)研究进展[J]. 中兽医学杂志 2017(05)
- [6].淮南麻黄鸡MHCⅠα链基因的克隆及序列分析[J]. 动物医学进展 2015(02)
- [7].牙髓干细胞MHC分子表达与体外混合淋巴细胞的增殖[J]. 中国组织工程研究 2014(50)
- [8].基于免疫MHC的否定选择算法孔洞修复方法[J]. 中国科学:信息科学 2020(10)
- [9].鸡MHCⅠ类分子信号肽的预测及其序列特征[J]. 畜牧与饲料科学 2015(12)
- [10].甲状腺癌MHC基因频率分布与可溶性主要组织复合物Ⅰ链相关蛋白A表达的关系[J]. 广东医学 2016(03)
- [11].兴国红鲤MHCⅡ类α基因多态性、表达及其与鱼体抗病力关系的分析[J]. 水生生物学报 2014(02)
- [12].紫红笛鲷MHC Ⅱα和MHC Ⅱβ多克隆抗体的制备[J]. 现代生物医学进展 2013(01)
- [13].尼罗罗非鱼MHC ⅡA基因的克隆、表达及多态性分析[J]. 水产学报 2012(08)
- [14].圆斑星鲽MHC ⅡB基因结构、多态性及组织表达分析[J]. 中国水产科学 2011(02)
- [15].圆斑星鲽MHCⅠα基因的克隆与组织表达分析[J]. 水产科学 2011(08)
- [16].尼罗鳄MHCⅡ类B基因第二外元的序列变异分析[J]. 激光生物学报 2010(06)
- [17].急性早幼粒细胞白血病与MHC—A~*基因的相关研究[J]. 中国优生与遗传杂志 2008(03)
- [18].MHC四聚体技术的应用研究进展[J]. 临床检验杂志 2016(07)
- [19].骨髓基质干细胞体外定向诱导后表面MHC抗原的表达[J]. 中国组织工程研究 2015(32)
- [20].尼罗罗非鱼MHC Ⅰα全长cDNA的克隆、多态性及组织表达特征[J]. 中国水产科学 2014(06)
- [21].左旋咪唑通过促进抗原呈递细胞MHC-Ⅱ表达而加重实验性自身免疫性脑脊髓炎[J]. 中国临床神经科学 2011(01)
- [22].妇科恶性肿瘤患者血清Ⅰ类MHC链相关蛋白A测定及意义[J]. 临床检验杂志 2011(05)
- [23].鹿科动物MHC的基因组学、多态性及与性状的相关性[J]. 四川动物 2009(04)
- [24].内蒙古地区布氏田鼠种群MHCⅡ类基因第二外显子的遗传分析[J]. 淮北师范大学学报(自然科学版) 2017(03)
- [25].中国西南地区猕猴MHCⅠ类部分等位基因调查[J]. 动物医学进展 2013(12)
- [26].广东养殖尼罗罗非鱼3个不同群体MHC ⅡB基因序列多态性和遗传分化[J]. 基因组学与应用生物学 2014(02)
- [27].鸡MHC多态性及血型与部分免疫指标的关联分析[J]. 中国家禽 2012(24)
- [28].野生动物MHC研究进展及蝙蝠MHC研究展望[J]. 长春大学学报 2009(02)
- [29].大熊猫Ⅰ类MHC基因的分离及分型技术的建立[J]. 科学通报 2013(16)
- [30].畜禽MHCⅠ分子抗原结合槽研究进展[J]. 中国畜牧兽医 2016(08)