糖尿病足感染中分离的耐甲氧西林葡萄球菌的临床特点及基因分型

论文摘要

目的:1.观察糖尿病足（Diabetic foot,DF）溃疡感染的病原菌分布特点;2.分析DF感染的葡萄球菌的耐药特点;3.探讨DF患者感染耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（Methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA）、耐甲氧西林表皮葡萄球菌（Methicillin-resistant Staphylococus epidemidis,MRSE）的危险因素;4.研究DF感染中MRSA和MRSE的SCCmec分型特点、不同型别的耐药特征及细菌的同源性。方法:收集2008年1月-2010年6月于我院糖尿病足病科住院治疗的388例DF患者的临床资料,总结感染病原菌的分布特点;根据棉拭子培养及药敏结果筛选金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,SA）和表皮葡萄球菌（Stphyloco-ccus epidermidis,SE）,分析它们的耐药特点;依据对甲氧西林耐药或敏感的特性,将感染SA的患者分为MRSA组和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（MSSA）组,感染SE的患者分为MRSE组和甲氧西林敏感表皮葡萄球菌（MSSE）组,分别对比分析MRSA组和MSSA组、MRSE组和MSSE组患者的临床特点,采用非条件logistic回归分别分析DF患者感染MRSA、MRSE的危险因素。提取分离的MRSA和MRSE菌株的DNA,用聚合酶链反应（PCR）检测mecA、pvl、lukE-lukD)基因,并对MRSA、MRSE进行SCCmec分型;分析不同SCCmec型别的耐药特点;应用脉冲场凝胶电泳分析耐药菌的同源性。结果:388例DF患者中共分离出362株病原菌,以革兰氏阳性菌为主（207株,57.2%）,革兰氏阴性杆菌142株（39.2%）,真菌13株（3.6%）。最常分离的三种病原菌为 SA（27.1%,98/362）、SE（18.8%,68/362）、绿脓杆菌（15.5%,56/362）。分离出的 SA 和 SE 菌株中 MRSA24 株（24.5%,24/98）、MRSE 18 株（26.5%,18/68）;MRSA、MRSE对β-内酰胺类、大环内酯类耐药率均在70%以上;对氟喹诺酮类耐药率在50.0%-79.2%之间。MRSE对复方新诺明耐药率较MRSA明显高（77.8%vs 33.3%,P<0.01）。MSSA、MSSE对大多抗菌药敏感,但青霉素G、大环内酯类耐药率均>60%。此外,所有MRSE都对利福平敏感,MRSA对利福平耐药率却高达33.3%。本研究未发现耐万古霉素葡萄球菌菌株。多因素logistic回归分析显示,入院前6个月内应用抗菌药物、溃疡病程长、合并骨髓炎、高血压、低蛋白血症是DF感染MRSA的危险因素;糖化血红蛋白是MRSE感染的危险因素。24株MRSA和18株MRSE mecA均为阳性;所有MRSA菌株pvl基因均为阴性,lukE-kD基因均为阳性;SCCmec分型:MRSA:Ⅰ 型 5 株（20.8%）、Ⅱ型 2 株（8.3%）、Ⅲ型 7 株（29.2%）、Ⅳ型 10 株（41.7%）;MRSE:Ⅱ 型 2 株（11.1%）、Ⅲ型 8 株（44.4%）、Ⅳ型 8 株（44.4%）,两者均未发现携带SCCmecV型的菌株。MRSA及MRSE中SCCmecⅣ型菌株耐药谱同Ⅰ-Ⅲ型菌株的相似,均为多药耐药,除了对β内酰胺类耐药外,对大环内酯类、磺胺类、喹诺酮类等非ββ内酰胺类抗菌药物耐药率也较高。脉冲场凝胶电泳显示,MRSA菌株相似度在42%-97%之间,分为11型（A-K）,12株为A型克隆株,包含多个亚型;B型2株;C型2株;其余8型各1株。MRSE菌株相似度在34%-100%之间,分14型（A-N）,5株A型克隆株中3株A1亚型,A2、A3亚型各1株;其余13型各1株。结论:本研究中DF感染的病原菌以革兰氏阳性球菌为主,SA和SE是最常分离的细菌,并且存在多重耐药现象;DF感染MRSA的相关危险因素为入院前6个月内应用抗菌药物、溃疡病程长、合并骨髓炎、高血压、低蛋白血症;糖化血红蛋白是MRSE感染的危险因素。所有分离的MRSA菌株均不携带pvl基因,均携带lukE-lukD基因;DF溃疡中分离的MRSA及MRSE以SCCmecΕ型和Ⅳ型为主,SCCmecⅣ型菌株已在DF感染中传播流行并且对多种药物耐药。本院糖尿病足病科2008.1-2008.5期间分离的MRSA菌株很可能有A型MRSA克隆株的爆发流行,2008.6-2010.6期间呈散发感染;2008.1-2010.6期间分离的MRSE菌株呈散发性,未发现有克隆株爆发流行。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 缩略语/符号说明
• 前言
• 研究现状、成果
• 研究目的、方法
• 一、糖尿病足感染MRSA、MRSE的临床特点
• 1.1 对象和方法
• 1.1.1 研究对象
• 1.1.2 病原菌的分离培养、鉴定、药敏实验及耐药菌的判定
• 1.1.3 临床资料的收集
• 1.1.4 诊断标准
• 1.1.5 分组情况
• 1.1.6 统计方法
• 1.2 结果
• 1.2.1 DF溃疡感染的病原体分布特点
• 1.2.2 葡萄球菌的耐药特点
• 1.2.3 各组患者的基本临床资料及合并症情况
• 1.2.4 DF感染MRSA、MRSE的危险因素分析
• 1.3 讨论
• 1.3.1 DF溃疡感染的病原体分布特点
• 1.3.2 葡萄球菌的耐药特点
• 1.3.3 各组患者的临床特点及DF感染MRSA、MRSE的危险因素分析
• 1.4 小结
• 二、DFI中MRSA、MRSE的SCCmec分型及同源性分析
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 实验材料
• 2.1.2 实验方法
• 2.2 结果
• 2.2.1 MRSA、MRSE的mecA、pvl、lukE-lukD基因的检出
• 2.2.2 MRSA、MRSE的SCCmec分型结果
• 2.2.3 SCCmec分型与MRSA、MRSE耐药间的关系
• 2.2.4 脉冲场凝胶电泳结果
• 2.3 讨论
• 2.3.1 DF感染的MRSA、MRSE的mecA、SCCmec分型特点及各型别的耐药特征
• 2.3.2 DF感染的MRSA的pvl及lukE-lukD基因特点
• 2.3.3 PFGE分型特点
• 2.4 小结
• 结论
• 参考文献
• 发表论文和参加科研情况说明
• 附录
• 综述 耐药葡萄球菌的分子流行病学及其在糖尿病足感染中的研究进展
• 综述参考文献
• 致谢